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膵島移植超急性期の機械化学応答による膵島破壊シグナルのイメージングサイエンス

胰岛移植超急性期机械化学反应引起的胰岛破坏信号的成像科学

基本信息

批准号：
24604004
负责人：
最上秀夫
金额：
$ 3.49万
依托单位：
Tokoha University (2013)Hamamatsu University (2012)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012-04-01 至 2014-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

膵島移植における最重要課題の一つは、膵島移植後に起こる超急性期炎症反応による膵島破壊を防止して膵島機能を維持し生着率を向上させることである。我々は以下のような作業仮説を立てて実験を行った。「膵島移植時に全血暴露時、血小板凝集及び血液凝固反応により、膵β細胞に発現する温度感受性及び活性酸素感受性イオンチャネルであるTRPM2チャネル（TRPM2）が活性化し、TRPM2を介したCa反応が膵島細胞死の責任シグナルの一つとなる。」。ラットインスリン産生細胞（INS-1）に発現するTRPM2ノックダウン安定細胞株（KD-INS）を作製し、コントロール細胞との比較実験を様々な条件下で行った。全血、多血小板血漿（PRP）、フィブリノーゲン（FBG)に対するカルシウム（Ca）応答及び全血、多血小板血漿（PRP）により誘発されるINS-1細胞死を観察した。D-INS細胞の電気生理学的検討より、TRPM2の内因性リガンドであるADP　Riboseにはほとんど反応しなかったが、電位依存性Caチャネル機能は保存されていた。KD-INS細胞では温度依存Ca応答及び過酸化水素に対するCa応答も有意に減弱していた。このKD-INS細胞を用いて全血、 PRP、FBGに対するKD-INS細胞のCa応答及び全血、PRPにより誘発されるINS-1細胞死を観察した。INS-1細胞においてCa応答は、全血、PRP及びFBGによって誘発された。このCa応答は、インテグリン阻害ペプチドやTRPM2の非特異的阻害薬2-APBによって阻害された。KD-INS細胞では、全血、PRP、FBGに対するCa応答は減弱していた。更に、全血、PRPにより誘発される細胞死も有意に減少していた。膵島が血液と接触することによりTRPM2が活性化され、TRPM2を介したカルシウム応答が細胞死を惹起して膵島破壊につながることが示唆された。

One of the most important issues in island transplantation is to prevent hyperacute inflammation after island transplantation and to maintain the survival rate of island function. The following is a list of activities that I would like to discuss with you. "When whole blood is exposed during islet transplantation, platelet aggregation and blood coagulation reactions occur, and temperature sensitivity and active acid sensitivity of beta cells occur, TRPM2 is activated, and TRPM2 is responsible for the death of islet cells." TRPM2 cells developed in a stable cell line (KD-INS) and compared with TRPM1 cells were tested under different conditions. Whole blood, platelet-rich plasma (PRP), and platelet aggregation (FBG) were used to investigate the effects of calcium (Ca) on INS-1 cells and the effects of PRP on INS-1 cells. The study of electrical physiology of D-INS cells, the intrinsic release of TRPM2 from ADP Ribose, and the potential-dependent Ca ~(2 +) production function are preserved. KD-INS cells are temperature-dependent Ca ~(2 +) and Ca ~(2 +)-dependent Ca ~(2 +)-dependent cells. The KD-INS cells were treated with whole blood, PRP and FBG, and the Ca 2 + response of KD-INS cells and INS-1 cell death induced by whole blood and PRP were observed. INS-1 cells contain Ca ~(2 +), whole blood, PRP and FBG. The non-specific inhibitor 2-APB of TRPM2 was selected as the inhibitor of Ca ~(2 +) and Ca ~(2 +). KD-INS cells were found to have decreased Ca 2 + responses in whole blood, PRP and FBG. In addition, whole blood and PRP are induced by cell death, which is intentionally reduced. TRPM2 is activated in the presence of blood, and TRPM2 is activated in the presence of blood.