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食道・胃機能へのTRPV1, TRPA1の関与ー分子から欠損マウスの解析までー

TRPV1 和 TRPA1 参与食管和胃功能 - 从分子到缺陷小鼠的分析 -

基本信息

批准号：
08F08455
负责人：
富永真琴
金额：
$ 1.28万
依托单位：
National Institutes of Natural Sciences Okazaki Research Facilities
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08F08455/
关键词：
神経科学生理学食道胃 TRPV1 TRPA1

项目摘要

マウス食道上皮でのTRPV4の発現を抗TRPV4抗体を用いた免疫組織学的解析およびRT-PCR法によって明らかにした。TRPV4様シグナルは、食道上皮最上層で強く観察された。マウス食道上皮細胞の培養系を確立し、野生型マウスから調整した培養食道上皮細胞において、TRPV4刺激剤GSK化合物による細胞内Ca^<2+>濃度上昇を観察した。また、パッチクランプ法を用いた解析によって、外向き整流性、陽イオン非選択性といったTRPV4に特徴的な性質を示す形質膜電流の活性化を観察した。この細胞内Ca^<2+>濃度上昇および膜電流の活性化はTRPV4欠損マウスから調整した食道上皮細胞では観察されなかった。シリコン膜上に培養した野生型マウス食道上皮細胞に伸展刺激装置によって機械伸展刺激を加えることによって細胞内Ca^<2+>濃度上昇とATP放出が観察されたが、TRPV4欠損マウス食道上皮細胞では機械伸展刺激を加えても、細胞内Ca^<2+>濃度上昇、ATP放出とも起こらなかった。小胞ATPトランスポーターVNUTを特異的抗体を用いて染色したところ、野生型マウス食道上皮細胞でTRPV4欠損マウス食道上皮細胞に比して強いシグナルが検出された。以上のことから、食道上皮細胞において機械刺激によってTRPV4が開口し、Ca^<2+>が流入してexocytosisを介してATP放出がもたらされているものと推定された。

TRPV4 in esophageal epithelium was detected by immunohistochemical analysis and RT-PCR. TRPV4 is the highest layer of esophageal epithelium. The increase of intracellular Ca^<2+> concentration in cultured esophageal epithelial cells stimulated by TRPV4 was observed. The characteristic properties of TRPV4 are characterized by the use of analytical, outward rectifying, and non-selective methods to investigate the activation of plasma membrane currents. The increase of intracellular Ca <2+> concentration and the activation of membrane current in TRPV4 cells were observed. In vitro culture, wild-type esophageal epithelial cells were stimulated by mechanical stretch stimulation, increased intracellular Ca <2+> concentration and ATP release. TRPV4 was deficient in esophageal epithelial cells. Cell ATP and VNUT specific antibodies were used to detect TRPV4 deficiency in esophageal epithelial cells. The above results indicate that TRPV4 is open to mechanical stimulation, and Ca <2+> is in flux.