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痛み受容体VR1,VRL-1の脳における機能の検討

检查疼痛受体 VR1 和 VRL-1 的大脑功能

基本信息

批准号：
13210016
负责人：
富永真琴
金额：
$ 3.01万
依托单位：
Mie University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13210016/
关键词：
痛みカプサイシン受容体 VR1 VRL-1 ATP 脳 P2Y_1受容体

项目摘要

これまでに全く知られていない痛み刺激受容体の脳における機能を解明するために、脳におけるVR1の発現を検討した。また、末梢神経における痛み刺激受容の制御機構を解明する目的で、炎症関連メデイエイターの1つである細胞外ATPのVR1機能に及ぼす効果を検討した。ラットを潅流固定後、脳・脊髄と陽性コントロールとしての後根神経節と同時包埋し、抗VR1抗体を用いて間接蛍光抗体法によって脳・脊髄におけるVR1の発現を検討した。脊髄においては深層に陽性細胞を、また脳においては皮質を含めて広い範囲に陽性シグナルを観察した。In situ hybridization 法、他のマーカーとの多重染色によって陽性神経細胞種の同定を進めるとともに、単離培養細胞での電気生理学的な実験からVR1陽性細胞の機能解析を行う予定である。VR1機能の細胞外ATPによる制御機構の解析は、VR1を発現させたHEK293細胞においてパッチクランプ法を適用して行った。細胞外ATPによってカプサイシン活性化、プロトン活性化電流は増大した。また、細胞外ATPによってVR1の熱活性化温度閾値は43度から35度に低下した。これは、細胞外にATPが存在すれば、体温でもVR1は活性化して痛みを惹起しうることを示す。この細胞外ATPによるVR1活性の制御は代謝型P2Y_1受容体を介して起こっていること、さらに、PMAによるPKCの直接活性化、PKC阻害剤の効果の検討等から細胞外ATPの効果にはPKCの活性化が関与することが示された。ラット後根神経節細胞でも同様のカプサイシン活性化電流の細胞外ATPによる増強効果が観察され、HEK293細胞及びラット後根神経節細胞におけるP2Y_1の遺伝子及び蛋白の発現が確認された。この代謝型受容体とイオンチャネル型受容体VR1の機能連関は全く新しい「疼痛発生システム」として注目される。

これまでに全く知られていないpainみstimulation receptor の脳におけるThe function is explained by the explanation of the function, and the function of the VR1 is explained.また、Peripheral nerves におけるPain みstimulation and tolerance control mechanism を Explain するpurpose で、Inflammation related メデイエイターの1つであるExtracellular ATPのVR1functionにandぼすeffectを検した. After the rhinoplasty was fixed, the positive and negative spinal cord was embedded at the same time, and the anti- The VR1 antibody was detected using the indirect photoantibody method. There are positive cells in the deep layers of the spine and positive cells in the cortex and in the cortex. In situ hybridization Method, his multi-staining method, positive divine cell species, の同定を入めるとともに, 嘘The functional analysis of VR1-positive cells based on electrophysiology of isolated cultured cells has been predetermined. Analysis of the extracellular ATP control mechanism of VR1 function, analysis of the VR1 function of the HEK293 cell, and application of the method of VR1. Extracellular ATP is activated and the current is increased by activating ATP. The thermal activation temperature threshold of VR1 for extracellular ATP is 43 degrees and 35 degrees is low.これは, extracellular ATP がexistence すれば, body temperature でもVR1 はactivation してpain みをcaused しうることをshow す.このExtracellular ATP によるVR1 activity control はmetabolite P2Y_1 receptor をmediated して出こっていること, さらに, PMA によるP The direct activation of KC, the effect of PKC blocking agent, etc. The effect of extracellular ATP and the activation of PKC are related to each other.ラットGogenshin ganglion cell でも同様のカプサイシン activating current の extracellular ATP による enhances the effect が観看され, HEK293 cells and Hogenshen ganglion cells, P2Y_1 and P2Y_1, are now confirmed.このmetabolic receptor とイオンチャネル-type receptor VR1のfunction-related は全く新しい『pain 発生システム』として看される.