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１型糖尿病におけるＴＲＰＡ１，ＴＲＰＭ２チャネル関与の検討

TRPA1 和 TRPM2 通道参与 1 型糖尿病的检查

基本信息

批准号：
13F03795
负责人：
富永真琴
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Okazaki Research Facilities, National Institutes of Natural Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13F03795/
关键词：
生理学神経科学膵臓 1型糖尿病 TRPチャネル TRPM8 TRPA1

项目摘要

マウス単離唾液腺房細胞の培養系において、TRPV4と ANO1が複合体を形成していることを共免疫沈降実験で確認した。マウス単離唾液腺房細胞でカルシウムイメージング法を用いて、TRPV4刺激剤による細胞内カルシウム濃度の上昇とそれにともなう細胞容積の縮小を観察した。このTRPV4刺激剤による細胞内カルシウム濃度の上昇と細胞容積の縮小は細胞外カルシウム依存的であり、TRPV4欠損マウスから調整した単離唾液腺房細胞では観察されなかったことから、TRPV4を介して流入したカルシウムによってANO1が活性化してクロライドイオン流出が水の流出（細胞容積縮小）を惹起しているものと考えられた。加えて、細胞内140mM CsCl、細胞外140 mM NaClの条件下で全細胞型パッチクランプ法によって外向き整流性を示す電流の活性化が観察された。この電流は、TRPV4阻害剤で完全に抑制されたことから、TRPV4の活性化を介して起こっていると考えられた。また、細胞内外140 mM NMDG条件下では、TRPV4刺激剤で外向き整流性を示すクロライド電流の活性化が観察された。こうした実験から、TRPV4活性化によって流入したカルシウムによってANO1が活性化したものと結論した。マウス唾液線からのアセチルコリン刺激による唾液分泌がTRPV4阻害剤で抑制された。マウス単離涙腺房細胞培養系も確立し、アセチルコリンのみならずTRPV4刺激剤で細胞内カルシウム濃度の上昇が観察された。マウス眼からの涙分泌量を測定し、アセチルコリンによる涙分泌がTRPV4阻害剤で抑制された。よって、TRPV4/ANO1機能連関によって涙腺房細胞から水分（涙）の流出が起こっているものと推定した。このように、唾液腺、涙腺での唾液、涙分泌にTRPV4/ANO1機能連関が関わっていることが明らかになった。

The formation of TRPV4 and ANO1 complexes in cultured salivary gland cells was confirmed by co-immunoprecipitation. The increase of intracellular concentration of TRPV4 in salivary gland cells and the decrease of cell volume were observed. TRPV4 stimulation increases intracellular cell concentration and decreases cell volume, and extracellular cell volume depends on TRPV4 deficiency and regulation. TRPV4 mediated inflow and outflow of ANO1 activity. Under the condition of addition of CsCl, 140mM CsCl in the cell and 140 mM NaCl in the cell, the activation of the whole cell type rectifier current was observed. The current and TRPV4 resistance are completely suppressed, and the activation of TRPV4 is initiated. The activation of TRPV4 currents was observed under 140 mM NMDG in vitro and in vivo. TRPV4 activation results in ANO1 activation Saliva secretion is inhibited by TRPV4 inhibitors. The increase of intracellular concentration of TRPV4 stimulating agent was observed in vitro culture system. The amount of TRPV secreted was measured and the TRPV4 was inhibited. TRPV4/ANO1 function is linked to the secretion of water from glandular cells and the estimation of its origin. The function of TRPV4/ANO1 is closely related to the secretion of saliva, salivary glands, and salivary glands.