大腸癌の転移・癌化のメカニズムの構造的基盤の解明

阐明结直肠癌转移癌变机制的结构基础

• 批准号: 08J09187
• 负责人: 瀬戸 あづさ
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: The University of Tokyo (2009)Tokyo Institute of Technology (2008)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J09187/
• 关键词: 転写; 結晶構造; タンパク質; HLH; X線; 構造生物学; 大腸癌; 結晶

本研究では「新規転写抑制因子GCIP/HHMの結晶学的解析」と題し、TGFβシグナル下流に存在するタンパク質であるGCIP/HHMの構造の解明に取り組んだ。初期スクリーニングによって得られた結晶に還元剤TCEPを加えることにより、分解能を6.0Åから3.5Åまで向上させ、GCIP/HHMが10本のヘリックスから成るバングル構造を持つことを明らかにした。しかし、モデル構築を行うには、分解能のさらなる向上が必要となり、複数の手法を用いて分解能向上を目指し、複数の手法を試みた。その結果、有機水銀化合物によるシステイン残基の非特異的結合の阻害により結晶の改善が見られた。改善された結晶では、分解能を3.05Åまで向上させることに成功し、モデル構築が可能な電子密度マップを得た。この電子密度マップより、GCIP/HHMの10本のヘリックスは、5本ずつの2本の束に分かれ、HLH領域によってつながったV字型の構造を持つことが明らかとなり、GCIP/HHMのHLH領域は、他の蛋白質のHLH領域に比べ、鋭い角度で曲がっていることが判明した。GCIP/HHMのHLH領域に存在するアミノ酸配列に類似した配列はまだ見つかっていないため、新規の構造であるさらに得られた構造より、GCIP/HHM分子の外側を向いているシステイン残基をセリン残基に置換した変異体を用いることにより、分解能を2.5Åまで向上させ、より詳細な部分の構造学的議論を行うことが可能になった。現在、共同研究者による機能解析の結果と照会し、論文を執筆中である。

This study で は "new rules planning write inhibitory factor GCIP/HHM の crystallographic analysis" と し, TGF beta シ グ ナ ル obscene に exist す る タ ン パ ク qualitative で あ る GCIP/HHM の tectonic の interpret に group take り ん だ. Early ス ク リ ー ニ ン グ に よ っ て have ら れ た crystallization に yuan also tonic TCEP を plus え る こ と に よ り, decomposition can を 6.0 A か ら 3.5 A ま で upward さ せ, GCIP/HHM が ten の ヘ リ ッ ク ス か ら into る バ ン グ ル tectonic を hold つ こ と を Ming ら か に し た. し か し, モ デ ル line build を う に は, decomposition can の さ ら な る が up necessary と な り, plural の gimmick を い て decomposition can up を refers し, plural の を try み た. Youdaoplaceholder0 そ results, non-specific binding of <s:1> residues of organic mercury compounds によるシステ <s:1> and <s:1>, <s:1> inhibition of によ and <s:1> crystallization <e:1> improvement が see られた. Can improve さ れ た crystallization で は, decomposition を 3.05 A ま で upward さ せ る こ と に successful し, モ デ ル build が may な electron density マ ッ プ を た. こ の electron density マ ッ プ よ り, GCIP/HHM の ten の ヘ リ ッ ク ス は, 5 this ず つ の 2 this の beam に points か れ, HLH に よ っ て つ な が っ た V の tectonic を hold つ こ と が Ming ら か と な り, GCIP/HHM の は HLH field, he の protein の に HLH field than べ, sharp Angle い で が っ て い Youdaoplaceholder0 る とが judge d 'arte た. GCIP/HHM の に HLH field exist す る ア ミ ノ acid with column に similar し た match column は ま だ see つ か っ て い な い た め, new rules の tectonic で あ る さ ら に have ら れ た tectonic よ り, GCIP/HHM molecular の lateral を to い て い る シ ス テ イ ン residues を セ リ ン residues に replacement し た - variant を with い る こ と に よ り can を, decomposition 2.5A まで upward させ, よ よ detailed な section になった discussion of structural science を line う う とが possible になった. Now, the results of the による functional analysis と of the co-researchers are sent to と, and the paper を is being written である.

项目成果

Crystallization and preliminary X-ray diffraction analysis of GCIP/HHM transcriptional regulator

• DOI: 10.1107/s1744309108038219
• 发表时间: 2009-01-01
• 期刊: ACTA CRYSTALLOGRAPHICA SECTION F-STRUCTURAL BIOLOGY COMMUNICATIONS
• 影响因子: 0.9
• 作者: Seto, Azusa;Ikushima, Hiroaki;Nureki, Osamu
• 通讯作者: Nureki, Osamu