Molekulare und funktionelle Analyse ausgewählter Komponenten des centrosomalen Proteoms von Dictyostelium discoideum

Das中心体ist der größte isolierbare protein复合物einer eukaryotischen Zelle mit einer Zellzyklus-abhängigen Zusammensetzung aus bis 100 verschiedenen Proteinen。微管细胞骨架组织研究、细胞因子研究、kentnis基因研究和蛋白质组分分析。Als Untersuchungsobjekt dient爹妈das Centrosom冯·Dictyostelium-Amoben das aufgrund unser Vorarbeiten der letzten四年静脉etabliertes Modellsystem坚持。Das Ziel des beantragten Projektes ist es， durch proteinchemische Charakterisierung and funktionelle Basisanalyse von möglichst vielen neuen proteincomponenten des Dictyostelium中心体in besseres Verständnis fredieses funktionell hoch konservierte Zellorganell zu gewinnen。Dazu soll von den protein isolierter centrrosomen, nach gelelektrophotischer bzw。现代质谱分析方法：möglichst umfassende Übersicht der Proteinzusammensetzung des中心体erhalten werden。研究了新鉴定的稻瘟病菌中心体组分的生物学特性和功能特性。Dies soll zunächst durch die subzelluläre entsprechenden protein的定位与GFP-Fusionsproteinen bzw。spezifischer Antikörper gegen das rekombinante蛋白叶酸。verversprechende候选人solelversprechende ßend durch Herstellung von“功能丧失”- dictyostium - mutantten sowie durch die Suche nach interaktionpartner weter untersucht werden。

Das Centrosom ist der größte isolierbare Proteinkomplex einer eukaryotischen Zelle mit einer Zellzyklus-abhängigen Zusammensetzung aus bis zu 100 verschiedenen Proteinen. Die Erforschung der Funktionen dieses Zellorgans bei der Organisation des Mikrotubuli-Cytoskeletts oder der Cytokinese setzt eine genaue Kenntnis und Charakterisierung seiner Proteinkomponenten voraus. Als Untersuchungsobjekt dient uns das Centrosom von Dictyostelium-Amöben, das aufgrund unserer Vorarbeiten der letzten Jahre ein etabliertes Modellsystem ist. Das Ziel des beantragten Projektes ist es, durch proteinchemische Charakterisierung und funktionelle Basisanalyse von möglichst vielen neuen Proteinkomponenten des Dictyostelium Centrosoms ein besseres Verständnis für dieses funktionell hoch konservierte Zellorganell zu gewinnen. Dazu soll von den Proteinen isolierter Centrosomen, nach gelelektrophoretischer bzw. chromatographischer Auftrennung, mit Hilfe modernster massenspektrometrischer Methoden eine möglichst umfassende Übersicht der Proteinzusammensetzung des Centrosoms erhalten werden. Parallel dazu soll eine Auswahl der neu identifizierten Centrosomkomponenten zellbiologisch und funktionell charakterisiert werden. Dies soll zunächst durch die subzelluläre Lokalisation der entsprechenden Proteine mit Hilfe von GFP-Fusionsproteinen bzw. spezifischer Antikörper gegen das rekombinante Protein erfolgen. Vielversprechende Kandidaten sollen anschließend durch Herstellung von "loss-of-function"-Dictyostelium-Mutanten sowie durch die Suche nach Interaktionspartnern weiter untersucht werden.