PPARγ発現調節機構の研究

PPARγ表达调控机制研究

• 批准号: 20890055
• 负责人: 脇 裕典
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20890055/
• 关键词: 発生・分化; 糖尿病; ゲノム; 転写調節; クロマチン

(A)'エピジェネティクスによるPPARg発現ポテンシャルの制御機構の検討発生分化の制御転写因子の発現ポテンシャルの維持に重要とされるエピジェネティクス変化がPPARgの発現制御に果たす役割を検討するために、抗体(抗H3K4me3、H3K27me3、H3K9me3、H3/4ac抗体など)を用いたクロマチン免疫沈降の系を、胎児線維芽細胞、3T3-L1/F442A細胞、NIH-3T3細胞において確立した。胎児線維芽細胞において、分化に重要な転写因子の発現ポテンシャルを規定するヒストン修飾H3K4me3,H3K27me3('bivalent' mark)を、また分化に伴うH3K4me3のみの活性型への変化が認められ、ヒストン修飾制御が分化における分化制御因子の発現制御のメカニズムのひとつであることが示唆された。(B)ヒトPPARg-BACの3T3-F442A細胞への導入による長距離発現制御領域の同定と機能アッセイ入手したヒトPPARgを含むBACクローンを、RecA/RecET組み換え法でKan/neoカセットを導入したクローンを作成した。カセットの導入はサザンブロッティングにより確認した。現在3T3-F442A細胞に導入後、安定発現細胞株を複数株クローニング中である。(C)PPARg遺伝子領域の比較ゲノミクスによる高相同性領域の検索多種動物間のゲノムデータベース上認められたPPARg近傍の高相同性領域のピークをリポーターベクターpGL3にクローニングを行っている。(A-1)Chromosome Conformation Capture(3C法)によるPPARg遺伝子領域のクロマチン高次構造の変化の解析クロマチン高次構造の変化がPPARgの発現制御に果たす役割を検討するために、3T3-L1/F442A、NIH-3T3、C2C12を中心に3C法の実験系の最適化を現在行っている。

(A) 'エ ピ ジ ェ ネ テ ィ ク ス に よ る PPARg 発 now ポ テ ン シ ャ ル の system of the royal institution の beg 発 検 raw differentiation の suppression planning write factor の 発 now ポ テ ン シ ャ ル の maintain に important と さ れ る エ ピ ジ ェ ネ テ ィ ク ス variations change が PPARg の 発 now suppression に fruit た す "を cut beg す 検 る た め に, antibody (anti H3K4me3, H3K2 7 me3, H3K9me3, H3/4 ac antibody な ど) を with い た ク ロ マ チ ン immune sink の を, tire line where d bud cells, 3 t3 L1 / F442A cells, NIH 3 t3 cells に お い て establish し た. Tire line where d bud cells に お い て, differentiation に important な planning write factor の 発 now ポ テ ン シ ャ ル を rules す る ヒ ス ト ン modify H3K4me3, H3K27me3 (' bivalent ' Mark) を, ま に た differentiation with う H3K4me3 の み の activity type へ の variations change が recognize め ら れ, ヒ ス ト ン modified suppression が differentiation に お け る suppression differentiation factor の 発 now suppression の メ カ ニ ズ ム の ひ と つ で あ る こ と が in stopping さ れ た. (B) ヒ ト PPARg - BAC の 3 t3 cells - F442A へ の import に よ る long-distance 発 の is suppression field with constant と function ア ッ セ イ of し た ヒ ト PPARg を containing む BAC ク ロ ー ン を, rec a / み RecET group in え で Kan/neo カ セ ッ ト を import し た ク ロ ー ン を made し た. Youdaoplaceholder0 カセット カセット ブロッティ ブロッティ ブロッティ ブロッティ ブロッティ グによ グによ サザ confirm that た た. Now, after the に introduction of 3T3-F442A cells, a stable cell line を multiple lines <s:1> ロ ニ ニ グ グ である are present. (C) PPARg heritage 伝 sub-fields の is ゲ ノ ミ ク ス に よ る high identity field の 検 cable between a variety of animals is の ゲ ノ ム デ ー タ ベ ー ス on recognition め ら れ た PPARg nearly alongside の high identity field の ピ ー ク を リ ポ ー タ ー ベ ク タ ー pGL3 に ク ロ ー ニ ン グ を line っ て い る. (A-1)Chromosome Conformation The Capture method (3 c) に よ る PPARg heritage 伝 sub-fields の ク ロ マ チ ン の high order structure - the の parsing ク ロ マ チ ン の high order structure - the が PPARg の 発 now suppression に fruit た す "を cut beg す 検 る た め に, 3 t3 L1 / F442A, NIH 3 t3, C2C12 を center に 3 c method の be 験 is の optimization Youdaoplaceholder0 now line って って る る.

项目成果

Identification of PPARgamma/RXR Binding Sites and Two Splicing Variants with Alternative Promoters in AdipoR2 genomic region in Adipocytes by Genome-wide ChIPseq Profiling

通过全基因组 ChIPseq 分析鉴定脂肪细胞 AdipoR2 基因组区域中的 PPARgamma/RXR 结合位点和两个具有替代启动子的剪接变体

• 发表时间: 2009
• 作者: Hironori Waki;Kenichi Wakabayashi;Toshimasa Yamauchi;Jing Yu;Tatsuhiko Kodama;Hiroyuki Aburatani;Juro Sakai;and Takashi Kadowaki
• 通讯作者: and Takashi Kadowaki

Chromosome conformation capture (3C)を用いたエピジェネティクス解析

使用染色体构象捕获进行表观遗传学分析 (3C)

• 发表时间: 2008
• 期刊: 内分泌・糖尿病科 27(6)
• 作者: 脇裕典;山内敏正;門脇孝
• 通讯作者: 門脇孝