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軟骨基質イメージング用マルチモードプローブ開発による変形性関節症治療の新戦略

通过开发软骨基质成像多模式探针治疗骨关节炎的新策略

基本信息

批准号：
20659232
负责人：
大橋俊孝
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20659232/
关键词：
関節炎生体イメージングデュアルモードプローブ軟骨 MRI

项目摘要

デュアルモードプローブの作製(二宮・大橋)20年度の成果に基づき、CSBP(R8)ペプチドに付加するシグナル発生部分の大きさの検討を行なった。蛍光タンパクであるEGFPを付加したR8-EGFPが軟骨基質に浸透可能であったことから、タンパク質量にして30kDa以下のものが、軟骨基質浸透性が良いと判断した。さらに、X線吸収性を持つ微小タンパクとして、メタロチオネインを候補とした。pETベクターにMT cDNAを組み込んだコンストラクトを構築し、BE21株に形質転換し、R8-MTタンパクを精製した。タンパク質の安定発現のため、GSTタンパク質との融合タンパクとして発現し、プレシジョンプロテアーゼにより切断後回収するほうが良い結果を得た。しかし、金含有タンパクの精製までには至らなかった。MRI検出プローブ作製を同時に進行させた。CSBP(R8)ペプチドに金属器レート剤のDOTAを結合させ、そこにGdを配位させる方法をとった。精製し、マスによる分子量同定を行なった。R8-DOTA(Gd)溶液はTI短縮効果を認めた。健常マウスと関節炎モデルマウス関節軟骨のイメージング(大橋・西田)イヌ大腿骨頭を摘出し、0.4mM R8-DOTA(Gd)に浸漬させ、1.5T MRIによる造影を行なった。同造影剤を含まない溶液での対照では関節軟骨が造影されなかったが、同し撮影条件で軟骨部の造影ができた。

デュアルモードプローブの Production (Ninomiya・Ohashi) 20th Annual Result of に本づき、CS BP(R8)ペプチドにFUKAするシグナル発生 PART の大きさの検question を行なった.荍光タンパクであるEGFPをFUKAしたR8-EGFPがcartilage matrixにinfiltration is possibleであったことから, タンパクquality にしてのものが below 30kDa, cartilage matrix permeability が好いとJudgment した.さらに, X-ray absorptive をholding つ micro タンパクとして, メタロチオネインを candidate とした. pET ベクターにMT cDNA を group み込んだコンストラクトを constructed し, BE21 strain morphological change し, R8-MT タンパクを refined した.タンパク性の stabilized 発appears のため、GST タンパク色とのfusion タンパクとして発appearし、プレシジョンプロテアーゼにより is cut and recycled and the result is good.しかし, gold contains タンパクの refined までには to らなかった. MRI is being produced simultaneously. CSBP (R8) metal tool レート剤のDOTA を combination させ, そこにGd を coordination させる method をとった. The molecular weight of refined し and マスによる is the same as that of を行なった. R8-DOTA(Gd) solution has a proven TI shortening effect. Kensei Matsui Arthritis Articular Cartilage Articular Cartilage (Ohashi・Nishida) Thigh Bone Extraction, 0.4mM R8-DOTA (Gd) Impregnation, 1.5T MRI is a contrast-enhanced image. It is the same as the contrast-containing solution and the articular cartilage contrast, and the same imaging conditions as the cartilage contrast.