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シナプス前クロライド濃度勾配の発生機構の解明

阐明突触前氯离子浓度梯度的产生机制

基本信息

批准号：
21650093
负责人：
神谷温之
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21650093/
关键词：
海馬シナプス伝達 GABA クロライドイオン

项目摘要

海馬苔状線維シナプスのシナプス前都にはGABA_A受容体が発現することが近年の研究で明らかになった。クロライドチャンネルであるGABA_A受容体の活性化により苔状線維終末の脱分極を生じることから、シナプス前部では細胞内クロライド濃度が細胞体より高く保たれていると推定されている。今年度は、細胞内クロライド濃度の神経細胞内の空間的な分布や濃度勾配を直接的に証明するために、蛍光クロライド指示薬を用いたシナプス前部でのクロライドイメージングを試みた。マウス海馬スライス標本において苔状線維の起始細胞である歯状回顆粒細胞に単一細胞レベルで蛍光クロライド指示薬MEQを負荷するために、単一細胞エレクトロボレーションの条件検討を行い、小型の細胞である歯状回顆粒細胞の細胞体に直視下に蛍光色素を効率的に導入することが可能になった。しかしながら、顆粒細胞の軸索である苔状線維軸索は極めて微細で、また、スライス内を立体的に走行し、共焦点顕微鏡を用いても苔状線維の神経終末部まで連続して蛍光をモニターすることが困難な場合がしばしばであった。そこで、もうひとつのアプローチとして、細胞膜透過型蛍光クロライド指示薬であるdihydro-MEQ(6-methoxy-N-ethyl-1,2-dihydroquinoline)を軸索標識法により多くの苔状線維に同時に導入することを試みている。苔状線維軸索の走行するCA3野透明層にdihydro-MEQを微量注入し、軸索内に取り込まれた後に軸索輸送の機構を介して輸送されることを利用して、多くのスライス表面の苔状線維シナプス前部(終末部および軸索部)に蛍光クロライド指示薬を負荷するための条件検討を行った。

Hippocampus mosses are the most important receptors for GABA_A. The activation of GABA_A receptor in the cell body was estimated by the concentration of GABA in the cell body. This year, the spatial distribution and concentration matching of intracellular concentrations in neurons are directly demonstrated by the use of light and light indicators. In the hippocampus, the initial cells of the mossy line, the individual cells of the dentate granule cells, the single cells of the dentate granule cells, the conditions of the single cells of the dentate granule cells, the conditions of the single cells of the dentate granule cells, the introduction of the pigment efficiency under direct vision, and the possible introduction of the pigment efficiency under direct vision. The axons of granular cells are extremely fine, and the axons run in three dimensions. The confocal microscope is used to connect the axons of granular cells to the ends of the brain. The axonal labeling method for dihydro-MEQ(6-methoxy-N-ethyl-1,2-dihydroquinoline), a cell membrane-permeable fluorescent indicator, is used to simultaneously introduce multiple moss-like dimensions. A microinjection of dihydro-MEQ into the transparent layer of the CA3 field of the moss-like cable, a microinjection of hydro-MEQ into the inner part of the cable, a