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機能不全リボソームを選択的に分解する新たな品質管理機〓

一种新的质量控制装置，可选择性降解功能失调的核糖体

基本信息

批准号：
09J04272
负责人：
坂田知子
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J04272/
关键词：
リボソーム品質管理ユビキチン

项目摘要

昨年報告したように、出芽酵母において活性の弱い変異型リボソームタンパク質Rp128(K110A)が分解される際、K110A変異体自身がユビキチン化を受けて単体として分解される可能性が高くなった。リボソーム全体が品質管理を受けていることを示すことが難しいため、このRp128変異体の研究は中断することとした。昨年度の研究において、機能不全リボソームを分解(nonfunctional rRNA decay: NRD)に必要なE3ユビキチンライゲース、RTT101-MMS1複合体の構成因子としてCRTIOというタンパク質が必要なことを発見した。研究目標である機能不全リボソーム分解機構の解明のため、CRT10pと結合するたんぱく質を探索した。MMS1-Flag,CRT10-HAの二段階で免疫沈降し、質量分析を行った結果、Paf1複合体が検出された。Paf1複合体はRNA polymerase IIに結合し、転写伸長因子などのプラットホームとなる。Western BlotによりPaf1複合体とCRT10との結合が確認できたが、Paf1欠損株株においても機能不全リボソームRNAの分解が抑制されなかったことから、Paf1はNRDに関与しないと考えられる。リボソームの分解に関わる結合パートナーはPaf1複合体の影に隠れている可能性があるため、Paf1欠損株において、MMS1-Flag,CRT10-HAの二段階で免疫沈降し、質量分析を行った。その結果、rvb1,rvb2(chromatin remodeling complex)などのタンパク質が同定された。CRT10はDNA損傷時にリボヌクレオチド還元酵素の発現を制御している。CRT10pはストレス時の損傷リボソームの分解とdNTP量の調節という2つの役割を使い分けており、それぞれ異なる基質を認識していると考えられる。本研究においてCRT10との結合が明らかになったPaf1複合体やRvb1-Rvb2複合体もDNA修復に関与することが知られている。放射線や活性酸素など、リボソームを破壊するストレスはDNAも傷つける可能性が高く、このMMS1-CRT10複合体は、ストレス時に複数の品質管理経路を司っていると考えられる。

Last year's report showed that budding yeast activity was weak and heterogeneous. When Rp128 (K110A) was decomposed, K110A itself was highly likely to be decomposed. All of them are in charge of quality control. In the past year's research, the nonfunctional rRNA decay (NRD) was necessary for the discovery of E3 protein, RTT101-MMS1 complex components and CRTIO protein. The purpose of this study is to explore the quality of CRT10p and its decomposition mechanism. MMS1-Flag, CRT10-HA two stage immune sedimentation, quality analysis results, Paf1 complex was detected. Paf1 complex binds to RNA polymerase II and writes elongation factors. Western Blot analysis of Paf1 complex and CRT10 showed that Paf1 complex and CRT10 were not fully functional. The possibility of Paf1 complex degradation, MMS1-Flag, CRT10-HA secondary immunosedimentation, mass analysis were performed. Rvb1, rvb2 (chromatin remodeling complex), rvb1, rvb2 (chromatin remodeling complex), rvb1, rvb2 (chromatin remodeling complex), rvb1, rvb2 (chromatin remodeling complex), rvb1, rvb2 (chromatin remodeling complex), rvb2 (chromatin remodeling complex), rvb1, rvb2 (chromatin remodeling complex), rvb2 (chromatin remodeling complex), rvb2 (chromatin remodeling complex), rvb1, rvb2 (chromatin remodeling complex), rvb2 (chromatin remodeling complex), rvb2 (chromatin remodeling complex), rvb1, rvb2 (chromatin remodeling complex), rvb2 (chromatin remodeling complex), rvb1, rvb2, rvb2 (chromatin remodeling complex), rvb1, rvb2, rvb2, CRT10 prevents the production of DNA reducing enzymes when DNA damage occurs. CRT10p is the first time that the damage is resolved and the amount of dNTP is adjusted. In this study, CRT10 and Paf1 complexes and Rvb1-Rvb2 complexes were identified. The possibility of DNA damage due to radioactive active substances is high, and the MMS1-CRT10 complex has a high probability of DNA damage due to radioactive active substances.