非典型的カルパインPalBHによる神経成長因子の機能制御

非典型钙蛋白酶 PalBH 对神经生长因子的功能调节

• 批准号: 09J06274
• 负责人: 大迫 洋平
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J06274/
• 关键词: カルパイン; 神経成長因子; プロテアーゼ; エンドサイトーシス; ESCRT; IST1

これまでに申請者らは、神経成長因子受容体p75^<NTR>の相互作用因子であるMAGE-D1と、ヒトcalpain-7(PalBH)との相互作用を検討したが、抗MAGE抗体の感度・特異性の問題もあり相互作用は検出できていなかった。しかし、MAGE-D1-p75^<NTR>複合体はエンドサイトーシス経路において形成され、calpair 7はエンドサイトーシス経路における選別装置ESCRTの関連因子CHMP1BならびにIST1と相互作用するため、calpain-7はESCRTシステム周辺で神経成長因子依存的シグナル伝達等に関与する可能性が考えられた。さらに、calpain-7はCHMP1BならびにIST1をはじめとする複数のESCRT関連因子により活性化され、プロテアーゼ活性により基質を切断することで神経成長因子依存的シグナル伝達等に影響を与えている可能性も考えられたため、calpain-7のプロテアーゼとしての性質を詳細に検討する目的で、バキュロウイルス発現系を利用し、培養昆虫細胞からの組換えcalpain-7の大量精製を試みた。その結果、アフィニティー精製、イオン交換精製、ゲルろ過の三段階のクロマトグラフィーにより、組換えcalpain-7を従来と比べて高収量かつ高精製度で取得する方法を確立することに成功した。また、ゲルろ過の過程でcalpain-7は他の典型的calpainとは異なり、単量体として存在するcalpainであることも示唆された。これはcalpain-7の生化学的性質に関する新たな知見である。今回確立した大量精製法は、calpain-7の酵素学的・構造生物学的解析に応用可能であり、将来的にはcalpain-7の基質の同定すなわちcalpain-7とESCRTシステムとの関連性ならびに神経成長因子依存的シグナル伝達等へ与える影響の解明に繋がると期待される。

The <NTR>interaction of MAGE-D1 and calpain-7(PalBH) with the receptor p75 of the growth factor receptor was discussed. The sensitivity and specificity of anti-MAGE antibodies were also discussed. The MAGE-D1-p75 <NTR>complex was formed in the middle of the process, calpair 7 was formed in the middle of the process, and the correlation factor CHMP1B and IST1 of the selection device ESCRT was formed in the middle of the process. The correlation factor CHMP1B and IST 1 of the selection device ESCRT was formed in the middle of the process, and calpain-7 was formed in the middle of the process. In addition, calpain-7 has a number of ESCRT related factors, such as activation, substrate activation, and growth factor-dependent effects on CHMP1B and IST1. The possibility of calpain-7's activation, substrate activation, and properties are discussed in detail. Cultured insect cells are highly refined. The results, purification, exchange purification, and three-stage process were successfully established. Calpain-7 is a typical example of calpain, which is different from other calpain processes. New knowledge about the biochemical properties of calpain-7 This paper establishes the possibility of mass purification of calpain-7 and its enzymatic and structural biological analysis, and expects the future application of calpain-7 to the identification of calpain-7 and ESCRT to the relationship between calpain-7 and ESCRT to the understanding of the effects of growth factor dependence.

项目成果

ESCRT-III関連因子CHMP1Aのリン酸化に関する解析

ESCRT-III相关因子CHMP1A磷酸化分析

• 发表时间: 2012
• 作者: 神田啓太郎;他6人;Keisuke Oka;Keisuke Oka;Kazuki Nagashima;Annop Klamchuen;Annop Klamchuen;Annop Klamchuen;Annop Klamchuen;長島一樹;長島一樹;長島一樹;Annop Klamchuen;岡敬祐;K.Nagashima;G.Meng;S.Rahong;A.Klamchuen;K.Oka;K.Nagashima;G.Meng;S.Rahong;A.Klamchuen;長島一樹;K.Nagashima;K.Nagashima;T.Yanagida;長島一樹;柳田剛;岡敬祐;長島一樹;長島一樹;K.Nagashima;A.Klamchuen;長島一樹;長島一樹;岡敬祐;長島一樹;岡敬祐;Kazuki Nagashima;Keisuke Oka;長島一樹;柳田剛;長島一樹;岡敬祐;柳田剛;Keisuke Oka;Kazuki Nagashima;Annop Klamchuen;Takeshi Yanagida;Masaki Kanai;Keisuke Oka;Takeshi Yanagida;Takeshi Yanagida;Masaki Kanai;Annop Klamchuen;長島一樹;Annop Klamchuen;岡敬祐;Annop Klamchuen;長島一樹;岡敬祐;柳田剛;長島一樹;柳田剛;長島一樹;岡敬祐;柳田剛;長島一樹;柳田剛;岡敬祐;長島一樹;長島一樹;岡敬祐;柳田剛;長島一樹;牧正敏(*共著論文);長島一樹;前本佑樹(*共著論文);岡敬祐;大迫洋平;柳田剛;前本佑樹(*連名発表)
• 通讯作者: 前本佑樹(*連名発表)

calpain-7の三者複合体形成と活性化の関連

calpain-7三联复合物形成与激活的关系

• 发表时间: 2011
• 作者: 前本佑樹(*連名発表)

ESCRT関連因子IST1によるcalpain 7の自己消化促進効果

ESCRT相关因子IST1对钙蛋白酶7的自溶促进作用

• 发表时间: 2010
• 作者: 前本佑樹(*連名発表);前本佑樹(*連名発表);大迫洋平;大迫洋平
• 通讯作者: 大迫洋平

Calpain-7 binds to CHMP1B at its second α-helical region and forms aternary complex with IST1

Calpain-7 在其第二个 α 螺旋区域与 CHMP1B 结合，并与 IST1 形成三元复合物

• DOI: 10.1093/jb/mvr071
• 发表时间: 2011
• 期刊: Journal of Biochemistry
• 影响因子: 2.7
• 作者: 神田啓太郎;他6人;Keisuke Oka;Keisuke Oka;Kazuki Nagashima;Annop Klamchuen;Annop Klamchuen;Annop Klamchuen;Annop Klamchuen;長島一樹;長島一樹;長島一樹;Annop Klamchuen;岡敬祐;K.Nagashima;G.Meng;S.Rahong;A.Klamchuen;K.Oka;K.Nagashima;G.Meng;S.Rahong;A.Klamchuen;長島一樹;K.Nagashima;K.Nagashima;T.Yanagida;長島一樹;柳田剛;岡敬祐;長島一樹;長島一樹;K.Nagashima;A.Klamchuen;長島一樹;長島一樹;岡敬祐;長島一樹;岡敬祐;Kazuki Nagashima;Keisuke Oka;長島一樹;柳田剛;長島一樹;岡敬祐;柳田剛;Keisuke Oka;Kazuki Nagashima;Annop Klamchuen;Takeshi Yanagida;Masaki Kanai;Keisuke Oka;Takeshi Yanagida;Takeshi Yanagida;Masaki Kanai;Annop Klamchuen;長島一樹;Annop Klamchuen;岡敬祐;Annop Klamchuen;長島一樹;岡敬祐;柳田剛;長島一樹;柳田剛;長島一樹;岡敬祐;柳田剛;長島一樹;柳田剛;岡敬祐;長島一樹;長島一樹;岡敬祐;柳田剛;長島一樹;牧正敏(*共著論文);長島一樹;前本佑樹(*共著論文)
• 通讯作者: 前本佑樹(*共著論文)

細胞内におけるcalpain-7の活性化とC末端欠損Mixの分解

细胞中 calpain-7 的激活和 C 末端删除的 Mix 的降解

• 发表时间: 2011
• 作者: 前本佑樹(*連名発表);前本佑樹(*連名発表)
• 通讯作者: 前本佑樹(*連名発表)