Strukturelle Charakterisierung der L-Aminosäureoxidase aus Rhodococcus opacus und zufällige/strukturbasierte Mutagenese zur Aufklärung des Reaktionsmechanismus

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Im Rahmen dieses Projektes soll eine bakterielle L-Aminosäureoxidase strukturell charakterisiert werden. Bislang existieren nur Strukturinformationen zu einer eukaroytischen L-Aminosäureoxidase. Die Aufgabe dieses Enzyms im Stoffwechsel der Bakterien ist bislang noch nicht untersucht worden. Mit Hilfe der Röntgenstrukturananlyse soll daher zunächst die dreidimensionale Struktur der bakteriellen L-Aminosäureoxidase aus Rhodococcus opacus aufgeklärt werden. Darüber hinaus sollen Mutageneseexperimente durchgeführt werden, die zum Verständnis des Reaktionsmechanismus auf molekularer Ebene beitragen sollen. Die Bestimmung der Lokalisierung des Proteins in der Zelle soll zusätzlich Hinweise auf die Rolle des Enzyms im Stoffwechsel der Zelle liefern. Im Rahmen des Projektes soll auch die Eignung von Streptomyces als heterologes Expressionssystem besonders für Seleno-Methionin-Mutanten untersucht werden, die für die Strukturaufklärung in den letzten Jahren immer wichtiger geworden sind. Die Expression von aktivem, rekombinanten Protein ist häufig in E. coli nicht möglich. Daher würde ein alternatives Expressionssystem, welches die rekombinante Herstellung von Proteinen und deren Mutanten ermöglicht, von großem Vorteil sein.