权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

Crk特異的阻害剤の新規スクリーニングシステムによる同定と脳腫瘍治療への応用

使用新的筛选系统鉴定 Crk 特异性抑制剂及其在脑肿瘤治疗中的应用

基本信息

批准号：
10J00952
负责人：
王磊
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

特別研究員採用最終年目である今年度は、I.脳腫瘍細胞株KMG4を用いたisogenic cell-based screening systemの樹立:KMG4細胞と、そのCrkノックダウン細胞に、firefly-およびrenilla-luciferaseを遺伝子導入して、KMG4-Crki-FFおよび測G4-Mock-RL細胞を樹立する。KMG4細胞への遺伝子導入は、高効率遺伝子導入が見込めるレトロウイルス発現システムを使用しました。樹立した細胞株について(i)様々な細胞外マトリックスに対する接着能を、マトリックス・コーティング・ディッシュを用いた培養により比較した結果、Crkの発現低下によって、ラミニンに対する接着性が減弱することが明らかになった。(ii)運動能の比較は、Wound-healing assayにより行った。CrkノックダウンKMG4細胞では運動能が低下することが分かった。(iii)通常の増殖アッセイおよびSoft-agar colony formationアッセイを行った結果、Crkは、足場依存性・非依存性、双方の増殖に重要であることが判明した。(iv)ヌードマウスに細胞をインジェクションするxenograftモデルを用いて、in vivoにおける腫瘍形成能を比較した結果、CrkノックダウンKMG4細胞における、腫瘍形成能の低下が認められた。II.化合物ライブラリーのスクリーニング:同数のKMG-Crki-FFとKMG4-Mock-RLを96-well-plateにて培養し、そこにライブラリーから1種ずつ化合物を作用させ、Dual-Luciferase-AssayによりCrk発現を維持しているKMG4-Mock-RL細胞の増殖のみを抑制する(即ちrenilla luciferase活性のみを低下させる)化合物を同定する。スクリーニングに使用する化合物は、(将来的には数千の化合物を含むものを製薬会社との共同研究でおこなうことも視野に入れているが)当面は数百程度の標準阻害剤からなるものを使用する。標準阻害剤ライブラリー(SCADS Inhibitor Kit)は、既に癌研究所・矢守博士から譲渡を受けている。今まで化合物ライブラリーのスクリーニング:100種類化合物のスクリーニングを行いました。結果はうち1種類化合物(X)はKMG4-Mock(Crk発現が高い)細胞の増殖のみ阻害する傾向が見られました。III.in vitroでの検証(現在進行中):同定した化合物が真にCrk阻害剤として機能するか否かの検証を、KMG4細胞のみならず、数種の脳腫瘍細胞株(現在準備中)も用いて行う。

Special researchers used the latest research methods to establish an isogenic cell-based screening system for KMG4 cells, KMG4-Crki-FF cells, and G4-Mock-RL cells. KMG4 cell line gene transfer, high efficiency gene transfer to see if it can be used for gene transfer. When the cell strain was established, the adhesion ability of the extracellular matrix was reduced, and the adhesion of the extracellular matrix was reduced. (ii)Comparison of kinetic energy, Wound-healing assay. Crk (iii)Usually, the growth of a Soft-agar colony results in Crk, field dependence, and mutual growth. (iv)The tumor formation ability of KMG4 cells was lower than that of Crk cells in vivo. II. Compound profile: The same number of KMG-Crki-FF and KMG4-Mock-RL were cultured on 96-well-plate, and the same number of compounds were identified by Dual-Luciferase-Assay to inhibit the proliferation of KMG4-Mock-RL cells. The use of these compounds in the field of chemical engineering is expected to exceed the standard resistance of hundreds of levels. SCADS Inhibitor Kit (SCADS Inhibitor Kit) is a standard inhibitor for cancer research. This is a list of compounds:100 species of compounds Results Compound (X) showed a tendency to inhibit proliferation of KMG4-Mock(Crk) cells. III.in vitro test (now in progress): the same compounds are true Crk inhibitors and functional test, KMG4 cells are tested, several tumor cell lines (now in preparation) are used in the test.