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細胞接着能を標的としたEVI1高発現白血病治療法の開発

开发高EVI1表达靶向细胞粘附能力的白血病治疗方法

基本信息

批准号：
21659241
负责人：
森下和広
金额：
$ 1.98万
依托单位：
University of Miyazaki
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ITGB4/ITGA6による細胞接着と抗がん剤耐性性の検討EVI1高発現白血病細胞に対してshITGB4、shITGA6,shITGB1を導入し、matrigel及びMC3T3-E1細胞に対する細胞接着能低下はshITGB4及びshITGA6のみ見られた。またそれぞれの中和抗体を用いた実験により、ITGB4及びITGA6が特異的に細胞接着能を落とした。EVI1低発現白血病細胞にEVI1遺伝子導入すると、EVI1遺伝子発現依存的にITGA6及びITGB4遺伝子発現及び細胞接着能の亢進が見られた。抗がん剤耐性性はAraC及びVP16に対して、EVI1及びITGB4/ITGA6発現、及び細胞接着に依存した耐性性を示した。2.ITGB4/ITGA6に対する遺伝子発現解析ITGB4/ITGA6発現陽性細胞株ではMatrigelやLaminin接着によりPI3K/Akt経路が活性化された。また同時に抗アポトーシス作用を有するBCL2が活性化され、抗がん剤耐性性に関わる事が分かった。3.ITGB4/ITGA6接着阻害効果のある抗体・新規低分子化合物の探索並びにin vivo試験ITGB4に対する中和抗体が接着阻害効果を示すことが明らかになったため、抗体研究所と共同で、phage display法によりヒトITGB4/ITGA6抗体を開発した。ITGA6/B4複合体(5種)、ITGA6(3種)に対する抗体をスクリーニングした結果、EVI1高発現白血病細胞株への細胞障害性、及び抗がん剤への感受性の増大を示す抗体が確認された。現在健常人末梢血を用いたADCC、CDCアッセイを行ない、更なる治療抗体の絞り込みを目指している。

The cells of 1.ITGB4/ITGA6 were resistant, tolerant, EVI1 was high, and leukemic cells were shITGB4, shITGA6,shITGB1, matrigel and MC3T3-E1. The cells were then able to lower shITGB4 and shITGA6. The neutralizing antibody can then be dropped by using the neutralizing antibody, ITGB4, and ITGA6 specific cells. The presence of EVI1 hypoleukemic cells, the presence of EVI1 cells, the presence of dependent ITGA6 and ITGB4 cells, and the subsequent hyperactivity of leukemic cells. AraC and VP16 tolerance were detected, EVI1 and ITGB4/ITGA6 were detected, and cell dependence was detected. The cell line of 2.ITGB4/ITGA6 was identified as Matrigel Laminin and then activated by PI3K/Akt. At the same time, the effects of anti-inflammatory drugs include the activation of anti-BCL2 drugs, the tolerance of anti-inflammatory drugs and the effects of anti-viral tolerance. 3.ITGB4/ITGA6 continues to block antibody novel low molecular compound detection and in vivo assay ITGB4 antibody neutralization assay and then block antibody detection. The results show that the antibody assay is sensitive, the antibody research institute is common, and the phage display method is used to detect ITGB4/ITGA6 antibodies. The results of ITGA6/B4 complex (5 species) and ITGA6 (3 kinds) antibodies were confirmed by Elisa results, the cell barrier of leukemia cell line was detected by EVI1, and the susceptibility of anti-leukemic cell line was confirmed by antibody. At present, the peripheral blood of normal people is treated with ADCC, CDC, antibody, antibody, and so on.