肺がん幹細胞特異的CTLが認識する抗原の同定研究

肺癌干细胞特异性CTL识别抗原的研究

• 批准号: 22501028
• 负责人: 葛島 清隆
• 金额: $ 1.75万
• 依托单位: Aichi Cancer Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22501028/
• 关键词: 癌; 免疫学; トランスレーショナルリサーチ

肺がん細胞株E522Lはadenocarcinoma組織から樹立された細胞株で、β_2ミクログロブリン蛋白の発現消失により細胞表面にHLA class-I分子を全く発現しない。目的とするHLA-A24を細胞表面に発現させるために、β_2ミクログロブリンとHLA-A24重鎖をグリシン-セリンのリンカーで共有結合させた単鎖HLA-A24分子およびCD86分子をこの細胞株に導入し、CTL誘導のための人工抗原提示細胞を作製した。この人工抗原提示細胞から"がん幹細胞"の形質を持った細胞を得るために、無血清培地にEGF、 bFGFなどの幹細胞増殖因子を添加して数週間培養し、球状の塊で増殖する細胞集団(以後スフェアと称す)を得た。造腫瘍性を確認するために、スフェアと元のE522L細胞を免疫不全マウスの皮下にそれぞれ100万個ずつ接種した。しかしながら、スフェアにおいても3匹中1匹で腫瘍の形成がみられるだけであった。また、"がん幹細胞"の自己刷新性の維持に必要な転写因子(Naonog, Sox2, Oct-4など)の発現をRT-PCR法で検討したが、元のE522L細胞とスフェア間で明らかな違いを見出すことができなかった。今回、"がん幹細胞"培養条件で得られたスフェアは、当初の予想に反して"がん幹細胞"としての形質を保有していないことが判明した。現在、他の肺がん細胞株数種からスフェアを培養し、"がん幹細胞"の形質を保有しているものを探している。そのような細胞を同定した後に、人工抗原提示細胞に変換してCTLの誘導を進める予定である。

Lung cancer cell line E522L was established from adenocarcinoma tissue, and HLA class-I molecules were fully expressed on the cell surface. Objective: To study the expression of HLA-A24 on cell surface, and to study the expression of HLA-A24 and CD86 in vitro. These artificial antigens suggest that the cells can be cultured in serum-free medium supplemented with EGF and bFGF, and that the cells can be cultured in spherical mass for several weeks. E522L cells are immune to infection and have been inoculated with 1 million cells subcutaneously. The shape of the skin is different from the skin. The development of essential factors (Naonog, Sox2, Oct-4) necessary for the maintenance of self-renewal of stem cells was investigated by RT-PCR in E522L cells. Today, the culture conditions of "stem cells" have been determined. At present, several kinds of lung stem cells are cultured, and the shape and quality of "stem cells" are preserved. After the cells are identified, artificial antigens prompt the cells to change and induce CTL.