Detecting mRNA with low expression levels on tissues using in situ RT-PCR Hybridization method: a pilot study

使用原位 RT-PCR 杂交方法检测组织中低表达水平的 mRNA：初步研究

• 批准号: 22590634
• 负责人: TOGA Tomoko
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Shimane University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010-04-01 至 2013-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22590634/
• 关键词: in-situ RT-PCR; mRNA; in situ Hybridization; 川本法; in situ RT-PCR

In order to detect small-quantity mRNA on a tissue section, reverse transcription PCR was given to create cDNA, next PCR was given to target mRNA. But amplification of the target gene by PCR was not completed.Then assumed to be stored efficiently RNA, using frozen sections fixed on the adhesive film (Kawamoto method) was applied to in situ Hybridization. Although the adhesive film could bear the protocol of in situ Hybridization in intensity, tissue sections often fall in the washing, and the dyeing residual substance remained in the film. In result, clear target's mRNA localization could not be found.

为了检测组织切片上的少量mRNA，采用反转录PCR方法制备cDNA，然后对目的mRNA进行PCR。但PCR扩增的目的基因并不完全，因此假设RNA被有效保存，采用冰冻切片固定在胶膜上（Kawamoto法）进行原位杂交。虽然胶膜强度能够承受原位杂交的要求，但在清洗过程中组织切片经常脱落，胶膜上残留有染色残留物。结果未发现明确的靶基因mRNA定位。

项目成果

硬組織における遺伝子発現解析研究への非脱灰凍結切片作成技術(川本法)の応用

非脱钙冰冻切片制备技术（川本法）在硬组织基因表达分析研究中的应用

• 发表时间: 2010
• 作者: Ushijima H;et al.;栂とも子他
• 通讯作者: 栂とも子他

ヒト石灰化病変の川本法を応用した非脱灰凍結切片の組織染色

使用人钙化病变的川本法对非脱钙冰冻切片进行组织染色

• 发表时间: 2012
• 作者: 雪吹周生;清野精彦;雪吹周生;栂とも子
• 通讯作者: 栂とも子

熱湯およびズダンブラックB処理法を応用した多重蛍光免疫染色の一例

使用热水和苏丹黑 B 处理方法进行多重荧光免疫染色的示例

• 发表时间: 2013
• 作者: 栂とも子;林芳弘, 山根史嗣
• 通讯作者: 林芳弘, 山根史嗣

しじみ貝の殻を含む全体組織染色-非脱灰凍結標本作成技術(川本法)を応用して

包括淡水蛤壳在内的全组织染色——应用不脱钙冷冻标本制备技术（川本法）

• 发表时间: 2011
• 作者: 雪吹周生;清野精彦;雪吹周生;栂とも子;雪吹周生;雪吹周生;雪吹周生;栂とも子他
• 通讯作者: 栂とも子他

硬組織における遺伝子発現解析研究への非脱灰凍結切片標本作製技術(川本法)の応用

非脱钙冰冻切片制备技术（川本法）在硬组织基因表达分析研究中的应用

• 发表时间: 2010
• 作者: 栂とも子;丸山理留敬;宇田川潤;高橋節典;高山公子;木村かおり;藤原純子;大塚洋輔;竹下治男
• 通讯作者: 竹下治男