心筋分化過程における心筋細胞表面マーカーの探索とその機能解析

心肌细胞分化过程中心肌细胞表面标志物的寻找及其功能分析

• 批准号: 22790704
• 负责人: 中島 康弘
• 金额: $ 2.16万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22790704/
• 关键词: 心筋細胞分化; ES細胞; 遺伝子; 再生医療

本研究の目的は、ES細胞から心筋細胞へ分化する過程における分化段階や細胞系列の異なる心筋細胞を区別することが可能な細胞表面マーカーを同定・解析し、これらのマーカーにより選別した心筋細胞の心筋再生への可能性を検討することである。ネオマイシンにより心筋細胞が選別可能なマウスES細胞ライン(Nkx2.5/NeoR ES細胞ライン)を用い、早期心筋分化マーカーの一つであるNkx2.5が欠損したES細胞由来心筋細胞(分化17日目)において発現レベルが有意に変化する遺伝子群をすでに同定した。Nkx2.5は心臓前駆細胞に発現し心筋分化を促進するため、同遺伝子群は心筋分化に伴って発現変化し、分化段階を区別できるマーカーである可能性があることから、同遺伝子群のうち細胞表面蛋白について心筋分化過程における発現変化をin votro ES細胞分化系とマウス胎生心で確認した。分化8日目までの胚様体において、Tgfβ receptor 3は3～6日目、Edg7は6日目において野生型ES細胞群に比べNkx2.5欠損ES細胞群でrealtime PCRの発現レベルの低下を認めた。また、胎生9.5日マウス心のin situ hybridizationにおいても、両遺伝子は心臓に発現し、Nkx2.5欠損マウスで発現レベルの低下を認めた。これらの結果から、両遺伝子は発生段階の心筋細胞においてNkx2.5依存的に発現変化する細胞表面マーカーである可能性が示唆された。今後は、EACSを用いてES細胞由来心臓前駆細胞における両遺伝子発現の解析、陽性細胞群の単離・培養、生着条件の検討を行い、心筋細胞における細胞表面マーカーとしての意義、心筋再生への可能性についてさらに検討を進める。

The aim of this study was to investigate the differentiation of ES cells into different stages and cell series, and to explore the possibility of differentiation of ES cells into different stages and cell lines. ES cell differentiation (Nkx2.5/NeoR ES cell differentiation) is the same as ES cell differentiation (Nkx2.5/NeoR ES cell differentiation). Nkx2.5 is the first cell to develop and differentiate into cardiac muscle cells. It is possible to differentiate into cardiac muscle cells with different differentiation stages. It is possible to differentiate into cardiac muscle cells with different differentiation stages. 8-day-old embryos, Tgfβ receptor 3, 3 - 6-day-old embryos, Edg7, 6-day-old embryos, wild-type ES cell populations, realtime PCR, and lower levels of Tgfβ receptor 3, Edg 7, and 6-day-old embryos were identified. 9.5 days after birth, the heart is in situ hybridization, the heart is in situ hybridization, and the heart is in situ hybridization. The results of this study indicate that the Nkx2.5-dependent development of cardiac muscle cells is possible. In the future, EACS will be used to analyze the origin of ES cells, the isolation and culture of positive cell populations, the study of growth conditions, the significance of cell surface changes, and the possibility of cardiac regeneration.