Improvement of helper-dependent adenovirus vector not only increasing gene expression but also cell/tissue specificity

辅助依赖性腺病毒载体的改进不仅增加基因表达而且增加细胞/组织特异性

• 批准号: 23590377
• 负责人: KANEGAE Yumi
• 金额: $ 3.33万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23590377/
• 关键词: 遺伝子治療; アデノウイルスベクター; 細胞特異性

The helper-dependent adenovirus vector (HD-AdV) is attractive tool for gene therapy, specially, genetic disease, because of its low-inflammation. However, it was reported that the purpose gene expression efficiency is lower than E1-substituted AdV. In this study, we determined the useful stuffer region and demonstrated an only 0.3kb DNA region near the rightend of the virus genome played an important role for efficient gene expression. And we showed that this region did not code any protein and enhancer.We also developed a construction method of "cell/tissue-specific HD-AdV", which contains a switch unit carrying Cre gene expressed by cell/tissue-specific promoter and a target unit bearing purpose gene expression unit regulated by Cre. We chose the TH promoter for the cell/tissue-specific promoter and GFP for purpose gene. Finally, we succeeded in the construction and detected the dopamine neuron specific expression by this vector.

辅助性腺病毒载体（HD-AdV）因其低炎症性而成为基因治疗，特别是遗传病治疗的重要工具。然而，有报道称目的基因的表达效率低于e1取代的adv。在本研究中，我们确定了有用的填充区，并证明了靠近病毒基因组右侧仅0.3kb的DNA区域对有效的基因表达起重要作用。我们发现这个区域不编码任何蛋白质和增强子。我们还开发了一种“细胞/组织特异性HD-AdV”的构建方法，其中包含一个携带由细胞/组织特异性启动子表达的Cre基因的开关单元和一个携带由Cre调控的目的基因表达单元的靶单元。我们选择TH启动子作为细胞/组织特异性启动子，选择GFP作为目的基因。最后，我们成功构建并检测了该载体对多巴胺神经元的特异性表达。

项目成果

Efficient production of adenovirus vector lacking genes of virus-associated RNAs that disturb celluar RNAi machinery

高效生产缺乏干扰细胞 RNAi 机制的病毒相关 RNA 基因的腺病毒载体

• 发表时间: 2013
• 期刊: Scientific Reports
• 影响因子: 4.6
• 作者: Maekawa A;Pei Z;Suzuki M;Fukuda H;Ono Y;Kondo S;Saito I;Kanegae Y
• 通讯作者: Kanegae Y

アデノウイルスベクターから常に発現しているvirus-associated (VA) RNAは標的細胞内の遺伝子発現に影響を与える

腺病毒载体持续表达的病毒相关 (VA) RNA 影响靶细胞中的基因表达

• 发表时间: 2013
• 作者: 近藤小貴;前川文;鈴木まりこ;鐘ヶ江裕美
• 通讯作者: 鐘ヶ江裕美

VA遺伝子破壊アデノウイルスベクターおよびそれを調製するための前駆体ベクター

VA基因破坏的腺病毒载体及其制备用前体载体

• 发表时间: 2012

アデノウイルスベクターの目的遺伝子挿入領域と向きはベクター作製や発現効率に影響を与えるか:Dual発現vector作製に向けた検討

腺病毒载体中目的基因的插入区域和方向是否影响载体生产和表达效率：对双表达载体生产的考虑

• 发表时间: 2013
• 作者: 鈴木まりこ;前川文;近藤小貴;鐘ヶ江裕美
• 通讯作者: 鐘ヶ江裕美

Dual-safe adenovirus vector lacking virus-associated RNA genes enhanced shRNA activity

缺乏病毒相关RNA基因的双安全腺病毒载体增强了shRNA活性

• 发表时间: 2013
• 作者: Kanegae Y;Maekawa A;Pei Z;Suzuki M;Kondo S;Saito I
• 通讯作者: Saito I