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Novel screening protocol for multi-SS bond proteins using SEP tags and its application to the development of a minimal Luciferase

使用 SEP 标签的多 SS 键蛋白的新型筛选方案及其在最小荧光素酶开发中的应用

基本信息

批准号：
23651213
负责人：
KURODA Yutaka
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至 2012
项目状态：
已结题

项目摘要

Bioluminescent proteins are indispensable tools for bio-imaging, and controlling and manipulating their molecular properties has become an important issue in protein engineering. Here we developed a novel screening method for improving the bioluminescent properties of Gaussia luciferase (GLuc). GLuc possesses 10 cysteins forming 5 SS-bonds, which make GLuc manipulation especially difficult, because the cysteins become entangled into non-native SS-bonds when GLuc is expressed in E-coli with traditional protocols. In the present study we used SEP tags to solubilize the protein and favor the formation of native SS-bonds in E-coli, which is a handy and inexpensive expression host. Using this new technique we isolated novel GLuc variants with red-shifted luminescence. The application range of this method can be extended to other SS-bond containing proteins, and the improved GLuc will contribute to complement the register of reporter proteins.

生物发光蛋白是生物成像不可或缺的工具，控制和操纵其分子特性已成为蛋白质工程的一个重要问题。在这里，我们开发了一种新的筛选方法，以提高生物发光特性的高斯荧光素酶（GLuc）。GLuc具有形成5个SS-键的10个半胱氨酸，这使得GLuc操作特别困难，因为当用传统方案在大肠杆菌中表达GLuc时，半胱氨酸变得缠结到非天然SS-键中。在本研究中，我们使用SEP标签来溶解蛋白质，并有利于在大肠杆菌中形成天然SS-键，大肠杆菌是一种方便且廉价的表达宿主。使用这种新技术，我们分离出具有红移发光的新型GLuc变体。该方法的应用范围可以扩展到其他含SS键的蛋白质，改进的GLuc将有助于补充报告蛋白的注册。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

構造ドメインデータベースの作成およびそのWeb提供

创建结构域数据库并在网络上提供

DOI：
发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
0
作者：
原田哲仁;大川恭行;梅澤祐貴,蝦名鉄平,黒田裕
通讯作者：
梅澤祐貴,蝦名鉄平,黒田裕

Solubilization and folding of a fully active recombinant Gaussia luciferase with native disulfide bonds by using a SEP-Tag

DOI：
10.1016/j.bbapap.2011.09.001
发表时间：
2011-12-01
期刊：
BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA-PROTEINS AND PROTEOMICS
影响因子：
3.2
作者：
Rathnayaka, Tharangani;Tawa, Minako;Kuroda, Yutaka
通讯作者：
Kuroda, Yutaka

単純化BPTIとペプチド系タグを用いたアミノ酸溶解性の時間的変化・揺らぎの解析

使用简化的 BPTI 和肽标签分析氨基酸溶解度的时间变化和波动

DOI：
发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
0
作者：
黒田裕;カンＡモンスル;イスラム M モニール
通讯作者：
イスラム M モニール

Effects of short solubility controlling peptide tags on protein solubility, thermodynamics, structure and function

短溶解度控制肽标签对蛋白质溶解度、热力学、结构和功能的影响

DOI：
发表时间：
2011
期刊：
影响因子：
0
作者：
Mohammad M Islam;Atsushi Kato;Shihori Sohya;Mohammed Khan;Keiichi Noguchi;Masafumi Yohda;Shun-ichi Kidokoro;Yutaka Kuroda
通讯作者：
Yutaka Kuroda

Probing the Physical Determinants of Thermal Expansion of Folded Proteins