Cdk活性化キナーゼによる卵子形成進行制御機構の解明

阐明 Cdk 激活激酶控制卵子发生进程的机制

• 批准号: 11J02886
• 负责人: 藤井 渉
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11J02886/
• 关键词: CDK活性化キナーゼ; 卵成熟; 遺伝子組換えマウス; Zinc Finger Nuclease; Cdk活性化キナーゼ(CAK); 卵子形成; 哺乳類卵

本研究は、哺乳類卵子形成過程におけるCDK活性化キナーゼ(CAK)の役割を明らかにすることを目的として、ブタおよびマウスの卵子形成の各過程におけるCAKの機能解析を行った。はじめに、ブタ卵成熟過程において、CAKはCDC2 161番スレオニン(CDC2-T161)のリン酸化を介したMPFの活性化によって減数分裂の進行に寄与しており、CAK複合体のキナーゼタンパク質であるCDK7が過剰に発現することによって染色体分離に異常を呈することなく通常より早期に第二減数分裂中期に到達することを見出した。また、卵成熟過程ではCAKの活性変動とは独立してCDC2-T161の脱リン酸化が引き起こされ、体細胞分裂においてCDC2-T161の脱リン酸化に機能するとされるものとは異なる脱リン酸化酵素が機能していることが示唆された。続いて、ブタ卵子形成過程においてBrUTPの取り込みを指標とした転写活性測定系を確立し、ブタ卵子形成過程における転写活性の動態を初めて明らかにした。また、CAK関連遺伝子群の機能解析に必要な遺伝子改変マウスを効率よく作製するために、人工ヌクレアーゼであるZinc Finger Nuclease (ZFN)を用いた遺伝子破壊マウスの作製を試み、4-6個のZinc FingerドメインからなるZFNのプラスミドベクターを効率よく作製する系を新たに確立した。これによって、1ヶ月程度といった極めて短期間で遺伝子破壊マウスの作製が可能となった。現在、本方法によってCAK制御関連遺伝子の遺伝子破壊マウスの作製を行っている。

The purpose of this study was to elucidate the function of CDK in mammalian egg formation. During the maturation process, CAK mediated the activation of MPF and the initiation of meiosis. CAK complex was activated at CDC2-T161 and CDK7 was detected at the early stage of meiosis. The activity of CAK during egg maturation is independent of the function of CDC2-T161 in deacidification, and the function of CDC2-T161 in deacidification during somatic cell division is independent of the function of CAK. In the process of egg formation, BrUTP is used to determine the activity of the egg. The function analysis of CAK-related gene subgroup requires the modification of gene expression rate, the artificial modification of Zinc Finger Nuclease (ZFN), and the establishment of a new system for the modification of gene expression rate. A short period of time is required to complete the task. Now, this method is designed to control the transmission of related genes.

项目成果

哺乳類卵の減数分裂におけるCDC2 T161のリン酸化制御機構

哺乳动物卵减数分裂过程中CDC2 T161的磷酸化控制机制

• 发表时间: 2012
• 作者: Tadanori Kurosawa;Tomoya Higashihara;Mitsuru Ueda;戸江哲理;石川智・鹿島薫・七山太・重野聖之;藤井渉
• 通讯作者: 藤井渉

The Regulation Mechanism of Phosphorylatlon of cdc2 rhreonine 161 During Porcine Oocyte Maturation.

猪卵母细胞成熟过程中cdc2 Rhreonine 161磷酸化的调控机制。

• 发表时间: 2012
• 作者: Tadanori Kurosawa;Tomoya Higashihara;Mitsuru Ueda;戸江哲理;石川智・鹿島薫・七山太・重野聖之;藤井渉;戸江哲理;Wataru Fujii
• 通讯作者: Wataru Fujii

CDK7 and CCNH Are Components of CDK-Activating Kinase and Are Required for Meiotic Progression of Pig Oocytes

• DOI: 10.1095/biolreprod.111.091801
• 发表时间: 2011-12-01
• 期刊: BIOLOGY OF REPRODUCTION
• 影响因子: 3.6
• 作者: Fujii, Wataru;Nishimura, Takanori;Naito, Kunihiko
• 通讯作者: Naito, Kunihiko

Analyses of the Involvement of PKA Regulation Mechanism in Meiotic lncon〕petence of Porcine Growing Oocytes.

PKA调控机制参与猪卵母细胞减数分裂失常的分析。

• DOI: 10.1095/biolreprod.112.101279
• 发表时间: 2013
• 期刊: Biology of Reproduction
• 影响因子: 3.6
• 作者: An-Dih Yu;Tadanori Kurosawa;Mitsuru Ueda;Wen-Chang Chen;戸江哲理;Takanori Nishimura
• 通讯作者: Takanori Nishimura

Establishment of novel method for repeated construction of engineered zinC finger nuclease.

建立重复构建工程锌指核酸酶的新方法。

• 发表时间: 2013
• 作者: An-Dih Yu;Tadanori Kurosawa;Ying-Hsuan Chou;Koutarou Aoyagi;Yu Shoji;Tomoya Higashihara;Mitsuru Ueda;Cheng-Liang Liu;Wen-Chang Chen;Tesuri Toe;石川智,鹿島薫,七山太;Wataru Fujii
• 通讯作者: Wataru Fujii