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Ifチャネルを指標としたヒトES細胞由来ペースメーカ細胞分取と自動能の分子基盤

人ES细胞来源的起搏细胞分选的分子基础和以If通道为指标的自动化能力

基本信息

批准号：
12J00001
负责人：
森川久未
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Tottori University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度は、ヒト胚性幹(ES)細胞由来ペースメーカ細胞の分取精製法の確立に関して重点的に研究を行った。まず、ヒトHCN4遺伝子を含むBACベクターを使用し、HCN4遺伝子のスタートコドン部位にGFPをノックインしたBACベクターを作製した。続いて、作製したBACベクターをヒトES細胞(KhES-1細胞)へ遺伝子導入し、導入株81株を樹立した。樹立したほぼ全ての細胞株で、心筋拍動部位でのGFP発現を確認することができた。その中から、最も発現の強い5株を選び、GFP陽性細胞を分取し解析したところ、HCN4を発現し、ペースメーカ型の自動能を有していた。したがって、今回樹立したヒトES細胞株からヒトペースメーカ細胞を分取できることが分かった。さらに、マウスES細胞由来HCN4陽性ペースメーカ細胞について、以下の研究成果を得ている。(1)Caイメージングと多点電極を用いた解析から、このペースメーカ細胞が他の作業心筋細胞を駆動するペースメーカ機能を有することを見いだした(論文準備中、国際特許出願済)。(2)エピジェネティック制御因子、ヘテロクロマチンプロテイン1γの発現量変化により、効率的に心筋細胞を誘導できることを発見した(Morikawa et al, BBRC, 2013.日本心電学会誌最優秀論文賞受賞)。(3)細胞表面抗原であるプリオンタンパク質を利用し、ES細胞の心筋分化誘導系から、遺伝子改変なく心筋細胞を単離できることを見いだした(Fujii et al, Circ J, 2012.日本循環器学会雑誌最優秀賞受賞)。本研究成果により、ヒトペースメーカ細胞の分取が可能になるとともに、ペースメーカ細胞の誘導、分取法の改善および特性の解析を進めることができた。

This year, the research on the origin of embryonic stem (ES) cells was carried out in order to establish the isolation and purification method of ES cells. The HCN4 gene contains the BAC gene, and the GFP gene contains the BAC gene. 81 introduced strains were established in ES cells (KhES-1 cells). GFP expression was confirmed in all cell lines and in the beating sites of the heart muscle. The most common type of cells was found in 5 selected cells and GFP positive cells. The cells were isolated from the stem cells. The origin of HCN4 positive cells in ES cells was studied. The following results were obtained. (1)Ca Multi-point electrodes are used for analysis, selection, and function of other operating cardiac cells (thesis preparation, international licensing). (2)The development of gene control factors, gene expression changes, and gene expression rates in cardiac muscle cells (Morikawa et al, BBRC, 2013. Best Paper Award of Journal of the Japanese Electrocardiology Society). (3)Cell surface antigens are used to induce differentiation of ES cells, and cell surface antigens are used to induce differentiation of ES cells (Fujii et al, Circ J, 2012. Best Award of Japan Society of Circulators). The results of this study are as follows: (1) the isolation of cells may be improved by induction and isolation of cells, and (2) the analysis of characteristics of cells may be improved by induction and isolation of cells.