Molecular analysis of BACs for the identification of the sex gene of asparagus

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Spargel (Asparagus officinalis L.) ist eine diözische Pflanze. Das L5-Chromosom trägt ein Gen, welches für die Geschlechtsdifferenzierung verantwortlich ist. Das Ziel des Projektes ist die vollständige Klonierung und Sequenzierung des Bereichs um das Geschlechtsgen herum und die Identifizierung sowie Analyse dort lokalisierter exprimierter Sequenzen. Dafür werden zuvor mit eng gekoppelten Markern isolierte Spargel BAC-Klone zu Gruppen überlappender Klone (contigs) zusammengefügt bzw. bereits bestehenden contigs zugeordnet. Durch genetische Kartierung von BAC-Subklonen und BAC-Endsequenzen wird die genetische Distanz zum Sex-Locus ermittelt und derjenige BAC identifiziert, welcher das Sexgen beherbergt. Dieser BAC wird vollständig sequenziert. Durch Vergleich möglicher transkribierter Sequenzbereiche mit Sequenzdatenbanken soll eine Kandidatensequenz ermittelt werden. In einem Sortiment verschiedener männlicher und weiblicher Spargellinien werden die entsprechenden Sequenzen ermittelt und verglichen, um das Sexgen zweifelsfrei identifizieren zu können. Durch Vergleich mit der genomischen Arabidopsis-Sequenz sollen Gene in Arabidopsis mit möglicherweise ähnlicher Funktion ermittelt werden. Es sollen erste Versuche zur Bestimmung der Funktion der Spargel-Genkandidaten in knockout Mutanten sowie in transgenen Arabidopsis durchgeführt werden, um so Mechanismen der Bildung männlicher Blütenorgane bei Pflanzen zu bestimmen.