細胞質ＤＮＡ受容体を標的としたＤＮＡアジュバントのナノ粒子による作用制御

使用纳米粒子控制靶向细胞质 DNA 受体的 DNA 佐剂的作用

• 批准号: 14F04353
• 负责人: 花方 信孝
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: National Institute for Materials Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-25 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14F04353/
• 关键词: DNA医薬; ナノメディシン; デリバリー; 免疫刺激

1,2-dioleoyol-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[4-(p-maleimidophenyl)butyramide] (MPB-PE; Avanti Polar Lipids)と3’末端をチオ化した24ヌクレオチドをマレイミドとの架橋反応を利用して結合させ、次に、MPB-PEに結合させたセンス鎖およびアンチセンス鎖を混合することによって、ハイブリダイゼーションさせ、2本鎖DNA-PEミセル複合体の形成を試みた。しかしながら、予想されたミセルは得られなかった。そこで、センス鎖とPEを結合させた分子のみでミセルを形成させ、その後、アンチセンス鎖を添加することによって、PE-センス鎖ミセル複合体のセンス鎖にアンチセンス鎖をハイブリダイゼーションさせた。このPE-2本鎖DNA複合体は、2本鎖DNAがPEから髪の毛状に伸びた状態であると考えられる。次にこのPE-2本鎖DNA複合体でマウスマクロファージを刺激し、炎症性サイトカインとI型インターフェロン (IFN) の誘導を調べが、いずれのサイトカインの誘導も観察されなかった。この原因は、PE-2本鎖DNA複合体の2本鎖DNAが細胞質DNA受容体に認識されないか、あるいはマクロファージ刺激のための添加量が少ないかのどちらかであると考えられた。PE-2本鎖DNA複合体を大量に合成するのは困難なため、PE-2本鎖DNA複合体をDOTAPあるいはリン酸カルシウム粒子に静電相互作用で搭載し、マクロファージへの取り込み効率の向上を試みた。その結果、PE-2本鎖DNA複合体をリン酸カルシウム粒子に搭載した二重複合体で顕著なI型インターフェロンの誘導が観察された。また、PE-2本鎖DNA複合体の2本鎖DNAにCpGを含む場合の方がCpGを含まない場合にくらべてI型IFNの誘導量が高かったことから、CpGを含む場合は、エンドソームのTLR9と反応し、その後、エンドソームからの脱出が起こり、細胞質DNA受容体との反応が起こること考えられた。

1,2-dioleoyol-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[4-(p-maleimidophenyl)butyramide] (MPB-PE; Avanti Polar Lipids)と3' terminal をチオ化した24ヌクレオチドをマレイミドとのbridge reaction を utilize して combined with させ, times, MPB-PEに combined with させたセンス Lock およびアンチセンス lock をmixed することによって、ハイブリダイゼーションさせ, 2-lock DNA-PEミセル complex is formed and tested.しかしながら、我想されたミセルは得られなかった.そこで、センス LockとPEをCombined させたmolecule のみでミセルをformed させ、その后、アンチセンス lockをAdd することによって、PE-センス Lock ミセル Complex のセンス Lockにアンチセンス Lock をハイブリダイゼーションさせた.このPE-2 lock DNA complex は, 2 lock DNA がPE から髪のhairy にStretch びたstate であると卡えられる. PE-2 original lock DNA complex でマウスマクロファージをstimulating し, inflammatory サイトカインとI type インターフェロン (IFN)のinducing を动べが, いずれのサイトカインのinducing も観看されなかった.このCause, PE-2 DNA complex, 2 DNA, cytoplasmic DNA receptor, knowledge of されないか, あるいはマクロファージstimulating のための が ないかのどちらかであるとtest えられた. PE-2 Honlock DNA Complex is difficult to synthesize in large quantities, PE-2 Honlock DNA Complex is difficult to synthesize, and PE-2 Honlock DNA Complex is DOTAP The るいはリン acid カルシウム particle and the electrostatic interaction are equipped with で, and the マクロファージへのtake the り込みefficiencyのUPをtestみた. As a result, the PE-2 DNA complex をリン acid カルシウム particle was loaded with a した double complex and a type I インターフェロンのinduced が禳看された.また, PE-2 Honlock DNA complex の2 Honlock DNA に CpG を む occasion の square が CpG を ま な い occassion に く ら べ て I type IFN の high か っ た こ と か ら, C pGをincludes occasionは、エンドソームのTLR9とanti応し、その后、エンドソームからの出が出こり、cytoplasmic DNA receptor とのanti-濜が出こること考えられた.