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新規結核菌受容体ＭＣＬが誘導するＭｉｎｃｌｅとは異なる獲得免疫活性化機構の解明

阐明新型结核杆菌受体MCL诱导的与Mincle不同的获得性免疫激活机制

基本信息

批准号：
14J03573
负责人：
森大輝
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J03573/
关键词：
自然免疫学 C型レクチン自然免疫 C型レクチン受容体

项目摘要

自然免疫応答はC型レクチン受容体などの認識受容体によって惹起される。多くのC型レクチン受容体はマクロファージなどのミエロイド系細胞に発現し、外来病原菌由来分子を認識する。一方、異常自己の認識に寄与することも報告されているが、内因性リガンドの同定は遅れている。C型レクチン受容体Dectin-2は病原体由来α-マンナンを認識するが、内在性リガンドに関する報告はない。そこで、リガンドの認識をGFPの発現でモニターできるレポーター細胞を作製し、様々な細胞と共培養したところ、骨髄由来樹状細胞共存下で強くGFP発現が誘導されることを見出した。このレポーター活性は、高濃度のマンノースの添加及びDectin-2のマンノース結合配列への変異の導入によって消失した。次に、Dectin-2と結合する分子を同定するため、ヒト免疫グロブリンのFc領域とDectin-2の細胞外領域を融合させたキメラタンパク質を作製し結合する分子を精製した。すると、70 kDa付近にDectin-2に特異的に結合する分子の存在が示唆され、質量分析法によってこの分子がβ-glucuronidaseであることが判明した。HEK293T細胞に強制発現させたβ-glucuronidaseでも、Dectin-2と結合することを証明し、この結合はβ-glucuronidaseに存在するN型糖鎖修飾配列に変異を導入すると顕著に低下した。また、マクロファージ細胞株でβ-glucuronidaseを強制発現させることで、Dectin-2レポーター細胞の活性が増大した。以上の結果より、Dectin-2は内在性リガンドの一つとしてβ-glucuronidaseを認識することが明らかとなり、C型レクチン受容体が内在性タンパク質の糖鎖の状態をモニターし、異常な自己細胞の感知に寄与している可能性が強く示唆された。

Natural immune response to C-type receptor and cognitive receptor activation The C-type receptor can be used to detect and recognize the origin of foreign pathogens in cell lines. One side, abnormal self-awareness and report to the other side, intrinsic self-awareness and determination of the other side C-type receptor Dectin-2 is reported to be related to the origin and intrinsic properties of the pathogen. The expression of GFP was detected in dendritic cells co-cultured in vitro. The activity of dectin-2 is higher than that of dectin-2, and Dectin-2 is higher than that of Dectin-2. Dectin-2 binds to the Fc domain and the extracellular domain of Dectin-2. The presence of a molecule that binds specifically to Dectin-2 near 70 kDa has been demonstrated, and it has been determined by mass spectrometry that this molecule is β-glucuronidase. HEK293 T cells are stressed to produce β-glucuronidase, Dectin-2 and binding protein, and the presence of β-glucuronidase and the introduction of N-type glycan modification are demonstrated. The activity of β-glucuronidase in cell lines increased under stress. The above results show that Dectin-2 has a strong possibility of recognizing the intrinsic state of β-glucuronidase, and C-type receptor has a strong possibility of recognizing the intrinsic state of β-glucuronidase and abnormal cell perception.