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鳥類ニワトリからの新規生理活性ペプチドの同定と生理機能解明

禽类新型生物活性肽的鉴定及其生理功能的阐明

基本信息

批准号：
14J05738
负责人：
益田恵子
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J05738/
关键词：
新規生理活性ペプチド

项目摘要

1つ目に、オーファン受容体GPR39の内因性リガンドの探索を行った。これまでに、抽出物の精製及び活性評価を繰り返すうちに、活性を見失ったり構造解析に必要な量が残らなかったりすることが多々あった。長鎖で疎水性の高いペプチドの精製時の非特異的吸着を避けることは困難であるが、活性評価において平滑筋ではなく受容体の応答を指標とすればサンプル消費量を最小限に抑えられる。そこで、グレリン受容体ファミリーに属し、2型糖尿病やうつ病への関与が示唆されているオーファン受容体であるGPR39の内因性リガンドの同定を試みた。そして、ニワトリヒナの腺胃の新規抽出法抽出物を逆相HPLCにより分画し、GPR39を発現させたHEK293細胞に添加した結果、細胞内カルシウム濃度を上昇させる画分があった。今後さらに精製を進めることにより、GPR39の内因性リガンドを同定できる可能性がある。また、他のオーファン受容体についても同様に、新規抽出法による内因性リガンドの同定が期待される。2つ目に、新規ペプチドの網羅的探索を行った。平滑筋や受容体の応答を指標としてスクリーニングを行うと、それらに作用するものしか追跡することができない。そこで、新規抽出法抽出物に含まれるペプチドの網羅的な同定を試みた。まず、ニワトリヒナの脳の新規抽出法抽出物をゲル濾過HPLCにより分画し、さらに各画分をSDS-PAGEにより分離した。そして、数十本のバンドの中から無作為に約8kDaのバンドを切り出し、ゲル内トリプシン消化を行い、nanoLC-MS/MSにより解析した。その結果、良好なMS/MSスペクトルが得られ、データベースと照合したところユビキチンと判明した。ユビキチンは既知のタンパク質であったが、今後、同様に他のバンドの解析を進めることにより新規ペプチドを同定できる可能性がある。

1 に subject に, <s:1> ファファファ exploration を row った of the receptor GPR39 <s:1> endogenicity リガ <e:1> ドを. これまでに, extract の refined and び active review 価を Qiao り return すうちに, active を see lost ったり structure に necessary な amount が residual らなかったりすることが more 々あった. Long locks で疎 high water-based のいペプチドの refined when の sorption of nonspecific を avoid けることは difficult であるが, activity evaluation 価において smooth muscle ではなく by let body の応 answer を index とすればサンプをル consumption minimum にえ suppression られる. そこで, グレリン by let body ファミリーにし and type 2 diabetes mellitus やうつ disease への masato and が in stopping されているオーファン by let body である GPR39 の endogenous リガンドの with fixed を try みた. そして, ニワトリヒナの glandular stomach の new rules extraction method to extract を reverse phase HPLC により painting し, GPR39 を発 now させた HEK293 cells に add した results, intracellular カルシウム concentration rising をさせる draw points があった. Future さらに refined を into めることにより, GPR39 の endogenous リガンドを with fixed できる possibility がある. また, he のオーファン by let body についても with others に, new rules extraction method による endogenous リガンドの with fixed が expect される. 2 に items に, exploration of new regulations ペプチドに lines った. Smooth muscle や by let body の応 answer を index としてスクリーニングを line うと, それらに role するものしか tracing することができない. Youdaoplaceholder0 でで, the new regulation for the extraction method of the extracted object に containing まれるペプチド scents な, the same regulation for を test みた. まず, ニワトリヒナの脳の new rules extraction method to extract をゲル filtration HPLC により painting し, さらに drawing points を sds-page により separation した. そして, a dozen のバンドの in から inaction に approximately 8 kda のバンドをりし, cutting ゲル within トリプシン digestion をい, nanoLC - MS/MS により parsing した. その results, good な MS/MS スペクトルが have られ, データベースと as close したところユビキチンと.at した. ユビキチンは already know のタンパク qualitative であったが, in the future, with others in に he のバンドの parsing を into めることにより new rules ペプチドを with fixed できる possibility がある.