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Ｄａｘ１を介したＥＳ細胞の自己複製維持機構の解析

Dax1介导的ES细胞自我更新维持机制分析

基本信息

批准号：
14J06649
负责人：
浦西洸介
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J06649/
关键词：
ES細胞 Dax1 Esrrb Ncoa3 Gata6 T

项目摘要

マウスES細胞において、核内受容体Dax1はOct3/4を中心とする転写因子ネットワークに属しており、自己複製維持において何等かの役割を果たしていると考えられる。本研究ではES細胞におけるDax1を介した自己複製維持機構の解析を行った。4HT添加によってDax1遺伝子をノックアウトできるコンディショナルノックアウトES細胞株を樹立し、遺伝子発現を確認したところ、ノックアウト２日では分化マーカーの遺伝子変化は見られなかったが、ノックアウト７日の細胞では内胚葉系マーカーであるGata6とTの発現の上昇が見られた。申請者は以前、EsrrbとDax1の相互作用を阻害すると内胚葉系マーカー遺伝子の上昇を確認しているため、Dax1のノックアウト時のGata6の発現上昇もEsrrbが何らかの関与をしていると考え、EsrrbのGata6の発現に対する作用を検証した。Gata6のプロモーター領域を用いてLuciferaseレポーターアッセイやChIPアッセイを行ったところ、EsrrbはGata6のプロモーター上にあるEsrrb結合配列に直接結合し、Gata6プロモーターの転写活性を上昇させていることが明らかになった。また、ES細胞において、Esrrbはco-activatorであるNcoa3と相互作用することが知られているため、Gata6プロモーターに対するNcoa3の作用を検証したところ、Ncoa3によってもGata6のプロモーター活性が上昇することが明らかとなった。このNcoa3によるGata6プロモーター活性の上昇は、Esrrbに結合できないDax1の変異体で抑制されたため、Dax1とNcoa3の相互作用を確認したところ、Dax1とNcoa3は直接結合できることが明らかとなった。以上のことから、Dax1はEsrrbだけではなく、Esrrbのco-activatorであるNcoa3も抑制することによってGata6プロモーターの活性を抑制することによりES細胞の自己複製維持に貢献していることが明らかになった。

This is not true of ES cells, Dax1 Oct3/4 cells, nuclear receptacles, nuclear receptors, nuclear In this study, we used the ES cell to copy the Dax1 to copy and maintain the data of the organization. The 4HT was added to the Dax1 cell line. The cell line was isolated, the ES cell line was isolated, the cell line was confirmed, the cell line was differentiated on the 2nd day, and the endodermis line was detected in the 7th day. The endodermis was isolated from the endodermis. In the past, the interaction between Esrrb and Dax1 prevented the endodermis of the endodermis from confirming that they were sick, and that the Gata6 was now responsible for the detection of Esrrb and Gata6, and that the Gata6 of Esrrb was effective. In the field of Gata6, you can use the Esrrb combination column in the field of Luciferase, Gata6, and writing activity to show that the Esrrb configuration column is displayed in the following fields: direct combination, direct combination, and write activity. The interaction of ES, ES, co-activator, Ncoa3, Gata6, Gata6, Ncoa3, Ncoa3, Gata6, activity, activity. Ncoa3