疎水性タグを用いたヒトインスリンの液相完全化学合成

使用疏水标签完成人胰岛素的液相化学合成

• 批准号: 14J06938
• 负责人: 藤田 裕子
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Tokyo University of Agriculture and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-01 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J06938/
• 关键词: ペプチド; 次世代シークエンサー; トランスクリプトーム解析; 細胞数計測; 細胞形態解析; Mahafacyclin B; ＣＨＯ細胞; 全遺伝子発現変動解析; 発現変動遺伝子; 細胞毒性; 疎水性タグ; ペプチド環化; コンフォメーション変化; アルカリ金属塩

今年度は前年度、ペプチドを溶解させた培地で培養した培養哺乳類細胞CHO-K1と、ペプチドを含まない培地で培養した同細胞のトランスクリプトームを比較することで、ペプチドによって誘導される細胞応答を明らかにすることを目的として行った次世代シークエンサーを用いたトランスクリプト―ム解析により展望可能性が認められた研究結果を更に深めるため、化学合成ペプチドの細胞への生理学的影響を多面的かつ精度よく評価するための手法を確立することにした。前年度の研究の課題として、設定した薬剤添加濃度が適したトランスクリプトーム応答をもたらしているかを調べる必要があった。そこで今年度は、前年度のシャノンの情報エントロピーという指標に加えて、コルモゴロフ複雑性を用いて細胞のトランスクリプトーム不均一度を評価した。また、対象の生理学的影響は、細胞増殖や細胞形態変化といった直接観察可能な要素も併せて評価するのが好ましい。そこでモデルペプチドの細胞増殖・生存に関して、トリパンブルーで死細胞を染色した細胞集団の自動細胞計測装置を用いた細胞数の直接計測によって評価した。また同装置で取得できる細胞写真の画像解析から細胞形態の評価を行った。その結果、細胞のトランスクリプトーム不均一度の評価を通して設定した実験の妥当性を確認することで、発現変動遺伝子解析結果に対する信頼性を高めることができた。また、ペプチドの細胞に与える細胞増殖、細胞死や細胞形態といった複数の影響を一つの実験系から得られる情報を用いて評価することができた。

This year, the number of cell cultures in the past year has increased significantly, compared with the number of cell cultures in the past year. The results of this study were analyzed and prospected. The results of this study were analyzed and analyzed. The physiological effects of chemical synthesis on the cellular response were analyzed and evaluated. The research topic of the previous year was to set the concentration of the additive to be appropriate and to adjust the concentration of the additive to be appropriate. This year, the previous year's information on the use of cell diversity index increase, increase, The physiological effects of these factors on cell growth and cell morphology can be directly observed and evaluated. The automatic cell counting device for cell counting in the cell collection is used to evaluate the direct measurement of cell number. The same device was used to obtain cell portrait analysis and cell morphology evaluation. The evaluation of the heterogeneity of the results, cell types, and the validation of the appropriateness of the settings are performed to determine the reliability of the analysis results. Cell growth, cell death, cell morphology, and multiple effects of cell growth, cell death, cell death,

项目成果

Hydrophobic benzyl amines as supports for liquid-phase C-terminal amidated peptide synthesis: application to the preparation of ABT-510

疏水性苄胺作为液相C端酰胺化肽合成的载体：在ABT-510制备中的应用

• DOI: 10.1002/psc.2791
• 发表时间: 2015
• 期刊: J. Peptide Science
• 作者: Emiko Matsumoto;Yuko Fujita;Yohei Okada;Esko I. Kauppinen;Hidehiro Kamiya;Kazuhiro Chiba
• 通讯作者: Kazuhiro Chiba