权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

合成生物学的アプローチによる鉄硫黄クラスター合成系の反応機構と多様性の解析

利用合成生物学方法分析铁硫簇合成体系的反应机理和多样性

基本信息

批准号：
14J12351
负责人：
田中尚志
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Saitama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

鉄硫黄（Fe-S）クラスターは鉄と硫黄から構成されるシンプルな形の金属コファクターだが、その生合成には複雑な多成分酵素系（マシナリー）が関与することが知られている。大腸菌は2種類のFe-Sクラスター生合成系（ISCとSUFマシナリー）を有しており、それぞれが独立してクラスターを合成しているが、これらを二重に破壊すると合成致死となるため、これまで詳細な遺伝学的解析が行われていなかった。一方、最近私は大腸菌のイソプレノイド合成経路を放線菌由来のメバロン酸経路に代謝改変することにより、クラスター生合成系の必須性を回避できることを見出した。この発見により、クラスター形成関連遺伝子群を自在に操作・解析して、その影響を正確に評価することができるようになった。そこで本年度は、この実験系を用いてISCマシナリーの中心成分であるIscU（クラスターの新規形成の足場）の機能解析を進めた。1.HscA/HscB （HSP70型シャペロン／コシャペロン）はISCマシナリーのクラスター形成機能に必須であるが、HscA/HscBの欠損をバイパスする二次的な変異をIscUの分子内部に同定した。クラスター形成反応においてHscA/HscBがIscUの構造変化を引き起こし、クラスター移行反応を促進させる可能性が考えられる。2.IscU Tyr3を他のアミノ酸に置換すると機能不全となるが、IscSの活性部位近傍の二次的なサプレッサー変異によって機能が回復する（平成26年度）。本年度では（野生型／機能不全型）IscUと（野生型／サプレッサー変異型）IscSをそれぞれ精製し、IscU-IscS間の相互作用および硫黄原子の受け渡し活性を調べたところ、IscU Tyr3がIscSから硫黄原子受け渡しの際の相互作用に重要であることを見出した。IscU Tyr3はIscSの活性部位近傍の構造変化を引き起こし、硫黄原子の移行反応を促進させる分子スイッチとして機能する可能性がある。

Iron sulfur (Fe-S) クラスターは鉄と sulfur から composed of されるシンプルなshaped metal コファクターだが, その生 Synthetic には雑な multi-component enzyme system (Masanaliー) is related to することが知られている. 2 kinds of coliforms, Fe-S クラスターbiosynthetic system (ISCとSUFマシナリー), しており, それぞれが independent してクラスターを合しているが、これらを二重に波壊するとSYNTHETIC DEATH となるため、これまでDetailed analysis of な伝学が行われていなかった. On the one hand, the origin of the recently private coliform bacteria, the synthetic bacteria, actinomycetes, and the origin of the acid bacteria Xie changed the できることることを见出した in order to avoid the necessity of the synthetic system of クラスター.この発见により, クラスターform the related remaining subgroup をfree operation and solution Analyze the influence of して and その and evaluate it correctly. This year's そこでは, この娓験式を Use the いてISCマシナリーのcentral component であるIscU (クラスターの新regulationの Footbath)'s functional analysis and progress. 1.HscA/HscB (HSP70 type シャペロン／コシャペロン) ISC マシナリーのクラスターIt is necessary to form the functionるが, HscA/HscB's lack of loss of をバイパスする secondary な変different をIscUの same molecular internal にした.クラスター Formation of anti-においてHscA/HscBがIscUのstructural change The possibility of させるpromoting させる and クラスターmigration reaction をがられる. 2.IscU Tyr3 is the active site of its acid replacement and insufficiency, IscS The second time of close contact with the Nasukuruta なサプレッサー変different によってfunction がReply する (Heisei 26). This year's では (wild type/incompetent type) IscU と (wild type/サプレッサーdifferent type) IscS をそれぞれRefined し、IscU-IscS interaction およびSulfur atom is accepted and crossed しActivity をadjusted べたところ、IscU Tyr3's IscS is very important because the sulfur atom is subject to the interaction between the two atoms. IscU Tyr3 and IscS's active site is close to the structural change that leads to it, and the sulfur atom's migration and reaction promotes the molecule's function and the possibility of it.