Strukturanalyse der humanen Amyloid Precursor Protein (APP) intrazellulären Domäne (AICD) im Komplex mit dem Adaptorprotein Fe65 und dem Membranrezeptor

与衔接蛋白 Fe65 和膜受体复合的人淀粉样前体蛋白 (APP) 胞内结构域 (AICD) 的结构分析

• 批准号: 5433099
• 负责人: Dr. Klemens Wild
• 金额: --
• 依托单位: Biochemie-Zentrum (BZH)
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2003-12-31 至 2010-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5433099?language=en
• 关键词: Strukturanalyse; der; humanen; Amyloid; Precursor

Die für die Alzheimer Krankheit charakteristischen amyloiden Ablagerungen (amyloide Plaques) entstehen im Wesentlichen durch die proteolytische Prozessierung des Amyloid Precursor Proteins (APP). APP ist ein integrales Typ I Membranprotein mit einer extrazellulären N-terminalen Ektodomäne, einer Transmembranregion und einer kurzen C-terminalen cytosolischen Domäne (AICD: APP Intracellular Domain). Der letzte Schritt der g-Sekretase abhängigen physiologischen Proteolyse innerhalb der Membran generiert die Amyloid-b Peptide (Ab) von 40 bzw. pathologisch relevanten 42 Aminosäuren, wobei nachfolgend (e-Schnitt) die lösliche AICD freigesetzt wird. Die AICD kann mit diversen cytosolischen Bindungspartnern interagieren, welche Transport, Prozessierung und transkriptionelle Aktivität von APP vermitteln bzw. modulieren können. Das Ziel des Vorhabens ist die Röntgenstrukturaufklärung von APP Fragmenten im Komplex mit physiologisch relevanten Bindungspartnern. So soll zunächst die AICD mit den Phosphotyrosin bindenden (PTB) Domänen der Adapterproteine Fe65 und Numb kristallisiert werden. Daraufhin soll die AICD in denselben Komplexen durch das membrangebundene b- bzw. a-prozessierte C-terminale Fragment von APP ausgetauscht werden. Weiterhin soll der multimere Komplex aus AICD, den beiden PTB Domänen von Fe65 und der ebenfalls für AIDS relevanten Histonacetyltransferase Tip60 strukturell untersucht werden. Folgende Methoden kommen zur Anwendung: (1) Klonierung der Proteinkonstrukte. (2) Überexpression der Proteine in Bakterien, Insektenzellen und Fliegenaugen. (3) Aufreinigung der Proteine im mg Maßstab. (4) Biochemische und biophysikalische Charakterisierung der Komponenten. (5) Kristallisation. (6) Röntgenstrukturanalyse oder falls keine Kristalle erhältlich: NMR und Peptidkartierung.

阿尔茨海默病的Krankterischen特征性淀粉样蛋白斑块（淀粉样蛋白斑块）通过淀粉样前体蛋白（APP）的蛋白水解过程进入Wesentlichen。APP是一种整合的I型膜蛋白，具有一个胞外N-末端结构域、一个跨膜区和一个胞质C-末端结构域（AICD：APP胞内结构域）。Der letzte Schritt der g-Sekretase abhängigen physiologischen Proteolyse innerhalb der Membran generiert die Amyloid-b Peptide（Ab）von 40 bzw. pathologisch relevanten 42 Aminosäuren，wobei nachfolgend（e-Schnitt）die lösliche AICD freigesetzt wird. AICD可以与多种细胞溶质相互结合，也可以与APP进行运输、处理和运输。modulieren können.前体的Ziel是APP碎片在复杂的生理学相关结合中的Röntgenstrukturaufklärung。因此，我们应该选择具有结合磷酸酪氨酸（PTB）的Adapterproteine Fe 65和Numb kristallisiert韦尔登的AICD。通过这些B- bzw的膜层，可以将AICD置于密集的复合材料中。α-prozessierte APP ausgetauscht韦尔登的C-末端片段。此外，由于AICD的多聚体复合物，铁65的PTB Domänen和艾滋病相关的组织乙酰转移酶Tip 60结构被韦尔登。其主要方法是：（1）蛋白质结构的克隆。(2)蛋白质在Bakterien、Insektenzellen和Fliegenaugen中的表达。(3)蛋白质的含量在mg Maßstab中。(4)成分的生物化学和生物物理学特性。(5)结晶化。(6)放射性结构分析或福尔斯没有晶体结构：NMR和肽。