Untersuchungen zur Rezeptor-Ligand Interaktion mit Hilfe neuer single chain TNF-Derivate

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Tumor-Nekrose-Faktor (TNF) ist ein Zytokin, welches in seiner biologisch aktiven Form als Homotrimer vorliegt und an zwei Membranrezeptoren bindet, wobei die eigentliche Signalinitiierung primär durch eine Trimerisierung der beiden Rezeptoren (TNFR1 und TNFR2) vermittelt wird. Wir haben ein TNF-Derivat konstruiert, bei dem die drei TNF Monomere eines Moleküls über kurze Peptidlinker miteinander verbunden sind (single chain TNF; scTNF). scTNF zeigt die Bioaktivität von normalem löslichem wildtyp TNF. Durch den Austausch bekannter Aminosäurereste von TNF können Derivate hergestellt werden, die selektiv TNFR1 bzw. TNFR2, oder aber keinen der beiden Rezeptoren binden. Das Einbringen dieser Mutationen in scTNF wird es uns erlauben, erstmals TNF-Derivate herzustellen, die einzelne Rezeptoren nur dimerisieren (nicht trimerisieren), die überhaupt nur mit einem einzigen Rezeptormolekül zu interagieren vermögen, oder aber die gezielt heteromere TNFR1/TNFR2-Mischkomplexe erzeugen. So wird es uns möglich sein, das Entstehen und die mögliche Funktion heteromerer Rezeptorkomplexe zu untersuchen, wie auch definierte Bindungsreaktionen kinetisch zu erfassen.