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ミトコンドリア内膜トランスロケータＴＩＭ２３とＴＩＭ２２複合体の構造生物学的解析

线粒体内膜易位蛋白TIM23和TIM22复合物的结构生物学分析

基本信息

批准号：
15J05215
负责人：
松本俊介
金额：
$ 3.33万
依托单位：
Kyoto Sangyo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-24 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は，Msp1とCdc48という２つのAAA-ATPアーゼの役割分担とDoa10による基質のユビキチン化とMsp1およびCdc48による膜引き抜きのどちらが先に起こるステップなのかを決定し，ミスターゲットTAタンパク質の分解機構の全容解明を目指した．まず，野生型酵母において，Msp1の基質のユビキチン化が細胞内のどこで起こるのかを調べた．細胞抽出液をミトコンドリア画分とサイトゾルに分画し，それぞれの画分から基質のユビキチン化を調べたところ，ユビキチン化基質はミトコンドリア画分とサイトゾルの両方に検出された．次に，msp1欠損株において，基質のユビキチン化を調べたところ，基質のユビキチン化はミトコンドリア画分とサイトゾル画分の両方に検出されたが，野生型酵母と比べて，ユビキチン化の効率が大きく低下することがわかった．一方，cdc48温度感受性株を用いて，基質のユビキチン化を調べたところ，ポリユビキチン化された基質はミトコンドリア膜に蓄積することがわかった．共免疫沈降実験によって，Msp1とCdc48のユビキチン化状態に応じた基質との結合を調べたところ，Msp1は非ユビキチン化基質と結合するが，ポリユビキチン化基質との結合は確認できなかった．一方で，Cdc48は非ユビキチン化とポリユビキチン化基質の両方と結合することがわかった．さらに，msp1欠損株を用いて，Cdc48と基質の結合を調べたところ，Cdc48と結合するポリユビキチン化基質の量が大きく減少した．このことから，Msp1は，Doa10による基質のユビキチン化を促進する因子であり，ポリユビキチン化基質をミトコンドリア膜から引き抜くためには，Cdc48が重要であることが示唆された．以上の結果をもとに，申請者は，ミスターゲットTAタンパク質の分解モデルを提唱した．

This year, Msp1とCdc48という２つのAAA-ATPアーゼの丫分分とDoa10による matrixのユビキチン化とMsp1およびC dc48 による影音き抜きのどちらが开开こるステップなのかをdeterminationし, ミスターゲットTAタンパク性のanalytical structure of the decomposition mechanism, the full explanation of the object refers to した.まず, wild-type yeast において, Msp1 の matrix のユビキチンがのどこでrise こるのかを Adjust べた． The cell extract liquid is divided into three parts, and the cell extract is divided into three parts. Change the tone of the べたところ, and the ユビキチンchange base はミトコンドリアdraw the points とサイトゾルの両square に検出された． Secondary に, msp1 defective strain において, matrix のユビキチン化をadjusted べたところ, matrix のユビキチン化はミトコンドリア画分とサイトゾル画分の両squareに検出されたが, wild-type yeast と比べて, the efficiency of ユビキチン化が大きく is low and the efficiency is low. On the one hand, the cdc48 temperature-sensitive strain is used, and the substrate is used to adjust the temperature. . Co-immunoprecipitation, Msp1 and Cdc48, のユビキチン, に応じたmatrix, binding, adjustment, べたところ, Msp1 is a non-confirmed matrix and is bound to the matrix, and a ポリユビキチンised matrix is bound to a confirmed matrix. On the one hand, Cdc48 is a non-conjugated substrate and a combination of non-conjugated substrates.さらに, msp1 deficiency strain をいて, Cdc48 and matrix の combination をべたところ, the amount of Cdc48 that binds to the substrate is reduced by a large amount.このことから,Msp1は,Doa10によるsubstrate のユビキチンをpromoting するfactor であり,ポリユビThe キチンbased matrix をミトコンドリアmembrane から cited き抜くためには, Cdc48 がimportant であることが Show された． The results of the above are the results of the applicant, the applicant, the quality of the application, and the quality of the application.