Charakterisierung der Genexpression und physiologischen Funktionen des mRNA- Bindeproteins IMP2 im murinen Zentralnervensystem

小鼠中枢神经系统中mRNA结合蛋白IMP2的基因表达和生理功能的表征

• 批准号: 5443506
• 负责人: Dr. Dana Krämer
• 金额: --
• 依托单位: Department of Pharmacology
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Fellowships
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2003-12-31 至 2006-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5443506?language=en
• 关键词: Charakterisierung; der; Genexpression; und; physiologischen

mRNA-Bindeprotein regulieren Prozesse wie z.B. mRNA Transport, Lokalisierung und Regulierung der Proteinbiosynthese. Damit sind mRNA-Bindeproteine nicht nur wichtige Faktoren in entwicklungsbiologischen Prozessen, sondern auch in der Regulation fundamentaler zellulärer Funktion. Das mRNA-Bindeprotein IMP2 wurde ursprünglich als Regulator der IGF-II leader 3 mRNA während der embryonalen Wachstumsphase entdeckt. Neuere Erkenntnisse zeigen jedoch, dass IMP2 auch in erwachsenen Organismen vorhanden ist, was darauf hinweist, dass die Rolle von IMP2 nicht nur auf entwicklungsbiologische Funktionen beschränkt ist. Das Ziel dieser Arbeit ist deshalb die detaillierte Untersuchung der biologischen Funktionen und Expression von IMP2 in vivo mit Hilfe verschiedener knock-out Muasmodelle. Ein IMP2 knock-out/LacZ knock-in Modell soll Aufschluss über in vivo IMP2 Expressionsmuster und den IMP2 Knock-out Phenotype geben. Die Rolle von IMP2 im murinen Zentralnervensystem wird mit Hilfe ein 'conditional IMP2 knock-out' untersucht werden. Diese Methode erlaubt die spezifische Ausschaltung von IMP2 in Neuronen während späterer Zeitpunkte und hilft so, mögliche Probleme während der Embryonalentwicklung zu vermeiden. Ein zusätzliches IMP2 knock-in Mausmodell wird eine neue Methode der Proteinreinigung nutzen, um Interaktionspartner von IMP2 zu identifizieren. Ein 'tandem affinity purification (TAP)-tag' wird an das Carbosylende vonIMP2 angehängt, mit welchem IMP2-Interaktionskomplexe (mRNAs oder Proteine) gereinigt werden können. Die so erhaltenen mRNAs werden entweder geklont und sequenziert oder mit Hilfe von microarrays identifiziert während Proteine, welche mit IMP2 interagieren, mit Hilfe von Massenspektrometrie identifiziert werden.

mRNA-Bindeprotein regulieren Prozesse wie z.B.蛋白质生物合成的mRNA转运、定位和调节。mRNA结合蛋白不仅在生物学过程中起重要作用，而且在调节细胞基本功能中也起重要作用。IMP 2 mRNA结合蛋白是IGF-II前导基因3 mRNA表达的调控因子。新的认识是，IMP 2也可以在有机体中使用，这是很重要的，因为IMP 2的作用不仅仅是生物学功能的发挥。本研究旨在通过基因敲除小鼠模型，详细研究IMP 2的体内生物学功能和表达。IMP 2基因敲除/LacZ基因敲入模型可用于IMP 2的体内表达调控和IMP 2基因敲除表型的建立。IMP 2在小鼠中枢神经系统中的作用将通过一种“条件性IMP 2敲除”的方法得到韦尔登。这种方法在神经元中引入了IMP 2的特异性，使其具有更高的Zeitpunkte和hilft，从而解决了胚胎发育的问题。一种新的IMP 2敲入方法是一种新的蛋白质重组方法，用于IMP 2的相互鉴定。一个串联亲和纯化（TAP）-标签将通过IMP 2-Interaktionskomplexe（mRNAs或蛋白质）连接到IMP 2上。这些特异性的mRNAs可以通过微阵列识别蛋白质，也可以通过IMP 2识别，通过质谱识别。