Charakterisierung der Genexpression und physiologischen Funktionen des mRNA- Bindeproteins IMP2 im murinen Zentralnervensystem

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mRNA-Bindeprotein regulieren Prozesse wie z.B. mRNA Transport, Lokalisierung und Regulierung der Proteinbiosynthese. Damit sind mRNA-Bindeproteine nicht nur wichtige Faktoren in entwicklungsbiologischen Prozessen, sondern auch in der Regulation fundamentaler zellulärer Funktion. Das mRNA-Bindeprotein IMP2 wurde ursprünglich als Regulator der IGF-II leader 3 mRNA während der embryonalen Wachstumsphase entdeckt. Neuere Erkenntnisse zeigen jedoch, dass IMP2 auch in erwachsenen Organismen vorhanden ist, was darauf hinweist, dass die Rolle von IMP2 nicht nur auf entwicklungsbiologische Funktionen beschränkt ist. Das Ziel dieser Arbeit ist deshalb die detaillierte Untersuchung der biologischen Funktionen und Expression von IMP2 in vivo mit Hilfe verschiedener knock-out Muasmodelle. Ein IMP2 knock-out/LacZ knock-in Modell soll Aufschluss über in vivo IMP2 Expressionsmuster und den IMP2 Knock-out Phenotype geben. Die Rolle von IMP2 im murinen Zentralnervensystem wird mit Hilfe ein 'conditional IMP2 knock-out' untersucht werden. Diese Methode erlaubt die spezifische Ausschaltung von IMP2 in Neuronen während späterer Zeitpunkte und hilft so, mögliche Probleme während der Embryonalentwicklung zu vermeiden. Ein zusätzliches IMP2 knock-in Mausmodell wird eine neue Methode der Proteinreinigung nutzen, um Interaktionspartner von IMP2 zu identifizieren. Ein 'tandem affinity purification (TAP)-tag' wird an das Carbosylende vonIMP2 angehängt, mit welchem IMP2-Interaktionskomplexe (mRNAs oder Proteine) gereinigt werden können. Die so erhaltenen mRNAs werden entweder geklont und sequenziert oder mit Hilfe von microarrays identifiziert während Proteine, welche mit IMP2 interagieren, mit Hilfe von Massenspektrometrie identifiziert werden.