セントロメアタンパク質ＣＥＮＰ－Ｂのセントロメア構築における機能の解析

着丝粒蛋白CENP-B在着丝粒构建中的功能分析

• 批准号: 16J10043
• 负责人: 藤田 理紗
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Waseda University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-22 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J10043/
• 关键词: セントロメア; CENP-A; CENP-B; クロマチン; CENP-Aヌクレオソーム; ヌクレオソーム

細胞分裂期における染色体の均等分配には、セントロメアの正常な形成が必要である。セントロメアの形成領域は、セントロメア特異的に形成されるCENP-Aを含むヌクレオソームによって決定づけられている。その際、CENP-Aと多数のセントロメアタンパク質の相互作用を介してセントロメアが構築される。本研究では、CENP-Aヌクレオソームに結合するCENP-Bのセントロメア構築における機能解明を目的とした。CENP-Bの機能として、CENP-BがCENP-Aヌクレオソームに結合することで、CENP-Aヌクレオソームの構造を変化させるのではないかと考えた。その点を明らかにするため、構造生物学的手法による解析に取り組んだ。本年度は、CENP-BのN末端領域のDNA結合ドメイン(DBD：DNA Binding Domain)を用いて、CENP-B DBD結合CENP-Aヌクレオソームのクライオ電子顕微鏡による単粒子解析に着手した。この手法では溶液中の構造を捉えることが可能である。観察に用いる複合体を急速凍結する際に、因子同士の結合を保持する必要があるため、架橋剤の種類の検討を行い、複合体の調製方法を確立した。また昨年度には、CENP-B DBDがCENP-AのN末端領域と結合することを見出している。この結果を受けて、この相互作用がCENP-B DBDのDNA結合の安定化に寄与する可能性を考えた。その点を検証するために、CENP-AのN末端領域のペプチドを添加した際のCENP-B DBDとDNAの複合体の熱安定性を解析した。本解析では、CENP-AのN末端領域はCENP-B DBDのDNA結合の安定化に寄与しないという結果が得られた。したがって、CENP-AとCENP-B DBDの相互作用には別の意義があると考えられる。今後、異なる解析手法によってその相互作用の意義の解明が期待される。

During the mitotic period, the chromosomes are evenly distributed and the chromosomes are evenly distributed. The normal chromosomes form the necessary chromosomes. The formation of a domain and a special CENP-A contains a decision on the formation of a domain and a special domain. Most of the international and CENP-An instruments are known to interact with each other. The purpose of this study is to understand the purpose of this study by combining the results of CENP-An and CENP-B experiments. The combination of CENP-B, CENP-B, CENP-A, computer, and CENP-An equipment can be used to improve the performance of chemical engineering. Please understand how to use the techniques of biology and biology to analyze the tissue samples. This year, CENP-B N-terminal DNA combined with DBD:DNA Binding Domain and CENP-B DBD combined with CENP-A were used to analyze the particles of computer microscopes. The gimmick was made in the solution, and it was possible to catch it. It is important to use the method of rapid transmission of the complex, the combination of factors and the combination of factors to maintain the necessary information, the operation of the system, and the method of the combination of the two. In the last year, the N-terminal field of CENP-B DBD CENP-A combined with the field of information technology. The results showed that the possibility of interaction between CENP-B DBD and DNA, stability and stability was tested. Point, CENP-B DBD, DNA, CENP-A, N-terminal domain, add a complex, stability analysis. The results of this analysis, the combination of the N-terminal CENP-B DBD DNA and the stabilization test and the analysis of the results of the analysis, the N-terminal field of CENP-B DBD and the combination of stabilization and stabilization are satisfactory. The interaction between CENP-An and CENP-B DBD has different meanings. From now on, we will analyze the meaning of "interaction" in order to understand the meaning of interaction.

项目成果

非コードRNAがクロマチンに与える影響の生化学的解析

非编码RNA对染色质影响的生化分析

• 发表时间: 2016
• 作者: Tetsuya Hori;Wei-Hao Shang;Masatoshi Hara;Mariko Ariyoshi;Yasuhiro Arimura;Risa Fujita; Hitoshi Kurumizaka; Tatsuo Fukagawa;藤田理紗;藤田理紗;藤田理紗;藤田理紗;藤田理紗;藤田理紗;Risa Fujita;Risa Fujita;藤田理紗
• 通讯作者: 藤田理紗

Nucleosome destabilization and histone exchange mediated by noncoding RNA

非编码 RNA 介导的核小体不稳定和组蛋白交换

• 发表时间: 2017
• 作者: Tetsuya Hori;Wei-Hao Shang;Masatoshi Hara;Mariko Ariyoshi;Yasuhiro Arimura;Risa Fujita; Hitoshi Kurumizaka; Tatsuo Fukagawa;藤田理紗;藤田理紗;藤田理紗;藤田理紗;藤田理紗;藤田理紗;Risa Fujita;Risa Fujita
• 通讯作者: Risa Fujita

非コード RNA がヌクレオソーム中のヒストン H2A-H2B 複合体の交換を促進する

非编码RNA促进核小体中组蛋白H2A-H2B复合物的交换

• 发表时间: 2018
• 作者: Tetsuya Hori;Wei-Hao Shang;Masatoshi Hara;Mariko Ariyoshi;Yasuhiro Arimura;Risa Fujita; Hitoshi Kurumizaka; Tatsuo Fukagawa;藤田理紗;藤田理紗
• 通讯作者: 藤田理紗

Biochemical analysis of the effect of noncoding RNA on the nucleosome

非编码RNA对核小体影响的生化分析

• 发表时间: 2017
• 作者: Tetsuya Hori;Wei-Hao Shang;Masatoshi Hara;Mariko Ariyoshi;Yasuhiro Arimura;Risa Fujita; Hitoshi Kurumizaka; Tatsuo Fukagawa;藤田理紗;藤田理紗;藤田理紗;藤田理紗;藤田理紗;藤田理紗;Risa Fujita
• 通讯作者: Risa Fujita

Methods for Preparing Nucleosomes Containing Histone Variants

• DOI: 10.1007/978-1-4939-8663-7_1
• 发表时间: 2018-01-01
• 期刊: HISTONE VARIANTS: METHODS AND PROTOCOLS
• 作者: Kujirai, Tomoya;Arimura, Yasuhiro;Kurumizaka, Hitoshi
• 通讯作者: Kurumizaka, Hitoshi