セントロメアタンパク質ＣＥＮＰ－Ｂのセントロメア構築における機能の解析

着丝粒蛋白CENP-B在着丝粒构建中的功能分析

• 批准号: 16J10043
• 负责人: 藤田 理紗
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Waseda University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-22 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J10043/
• 关键词: セントロメア; CENP-A; CENP-B; クロマチン; CENP-Aヌクレオソーム; ヌクレオソーム

細胞分裂期における染色体の均等分配には、セントロメアの正常な形成が必要である。セントロメアの形成領域は、セントロメア特異的に形成されるCENP-Aを含むヌクレオソームによって決定づけられている。その際、CENP-Aと多数のセントロメアタンパク質の相互作用を介してセントロメアが構築される。本研究では、CENP-Aヌクレオソームに結合するCENP-Bのセントロメア構築における機能解明を目的とした。CENP-Bの機能として、CENP-BがCENP-Aヌクレオソームに結合することで、CENP-Aヌクレオソームの構造を変化させるのではないかと考えた。その点を明らかにするため、構造生物学的手法による解析に取り組んだ。本年度は、CENP-BのN末端領域のDNA結合ドメイン(DBD：DNA Binding Domain)を用いて、CENP-B DBD結合CENP-Aヌクレオソームのクライオ電子顕微鏡による単粒子解析に着手した。この手法では溶液中の構造を捉えることが可能である。観察に用いる複合体を急速凍結する際に、因子同士の結合を保持する必要があるため、架橋剤の種類の検討を行い、複合体の調製方法を確立した。また昨年度には、CENP-B DBDがCENP-AのN末端領域と結合することを見出している。この結果を受けて、この相互作用がCENP-B DBDのDNA結合の安定化に寄与する可能性を考えた。その点を検証するために、CENP-AのN末端領域のペプチドを添加した際のCENP-B DBDとDNAの複合体の熱安定性を解析した。本解析では、CENP-AのN末端領域はCENP-B DBDのDNA結合の安定化に寄与しないという結果が得られた。したがって、CENP-AとCENP-B DBDの相互作用には別の意義があると考えられる。今後、異なる解析手法によってその相互作用の意義の解明が期待される。

During the cell division period, における chromosomes <s:1> are evenly distributed に に and セ トロメア トロメア <s:1>. The normal な formation が is necessary である. セ ン ト ロ メ ア は の form field, セ ン ト ロ メ ア specific に form さ れ る CENP - contains A を む ヌ ク レ オ ソ ー ム に よ っ て decided づ け ら れ て い る. そ の interstate, CENP - A most と の セ ン ト ロ メ ア タ ン パ ク qualitative の を interaction interface し て セ ン ト ロ メ ア が build さ れ る. This study で は, CENP - A ヌ ク レ オ ソ ー ム に combining す る CENP - B の セ ン ト ロ メ ア build に お け る function interpret を purpose と し た. Function of CENP - B の と し て, CENP - B が CENP - A ヌ ク レ オ ソ ー ム に combining す る こ と で, CENP - A ヌ ク レ オ ソ ー ム を の structure - the さ せ る の で は な い か と exam え た. Youdaoplaceholder0 を points を clarity ら にするため にするため, the techniques of structural biology による analysis に take the そ group んだ. This year は, CENP - B の N terminal の dna-binding ド メ イ ン (DBD: DNA Binding Domain) を い て, CENP - B DBD Binding CENP - A ヌ ク レ オ ソ ー ム の ク ラ イ オ electronic 顕 micromirror に よ る 単 particle analytical に to し た. The <s:1> <s:1> technique で で in solution を structure を capture える とが とが possible である. 観 examine に with い る complex を quick freezing す る interstate に, factor with James の を keep す る necessary が あ る た め wires, tonic の kinds の beg を 検 い, complex の を modulation method established し た. Youdaoplaceholder0 in the previous year, に に, CENP-B DBDが, CENP-A <s:1> n-terminal domain と combined with する とを とを とを showed that て て る る る る る る. The <s:1> results を are subject to けて, <s:1> interaction がCENP-B DBD <s:1> DNA binding <s:1> stabilization に and する possibility を to investigate えた. そ の point を 検 card す る た め に, CENP - A の N terminal areas の ペ プ チ ド を add し た interstate の CENP - B DBD と の DNA complex の thermal stability analytical し を た. This analytical で は, CENP - A の N terminal areas は CENP - B DBD の dna-binding の stabilization に send し な い と い う results ら が れ た. Youdaoplaceholder0, CENP-AとCENP-B DBD <s:1> interaction に に different <s:1> significance があると examination えられる. In the future, the different なる analytical techniques によってそ the interaction <s:1> meaning <e:1> clarification が expectation される.

项目成果

非コードRNAがクロマチンに与える影響の生化学的解析

非编码RNA对染色质影响的生化分析

• 发表时间: 2016
• 作者: Tetsuya Hori;Wei-Hao Shang;Masatoshi Hara;Mariko Ariyoshi;Yasuhiro Arimura;Risa Fujita; Hitoshi Kurumizaka; Tatsuo Fukagawa;藤田理紗;藤田理紗;藤田理紗;藤田理紗;藤田理紗;藤田理紗;Risa Fujita;Risa Fujita;藤田理紗
• 通讯作者: 藤田理紗

Nucleosome destabilization and histone exchange mediated by noncoding RNA

非编码 RNA 介导的核小体不稳定和组蛋白交换

• 发表时间: 2017
• 作者: Tetsuya Hori;Wei-Hao Shang;Masatoshi Hara;Mariko Ariyoshi;Yasuhiro Arimura;Risa Fujita; Hitoshi Kurumizaka; Tatsuo Fukagawa;藤田理紗;藤田理紗;藤田理紗;藤田理紗;藤田理紗;藤田理紗;Risa Fujita;Risa Fujita
• 通讯作者: Risa Fujita

非コード RNA がヌクレオソーム中のヒストン H2A-H2B 複合体の交換を促進する

非编码RNA促进核小体中组蛋白H2A-H2B复合物的交换

• 发表时间: 2018
• 作者: Tetsuya Hori;Wei-Hao Shang;Masatoshi Hara;Mariko Ariyoshi;Yasuhiro Arimura;Risa Fujita; Hitoshi Kurumizaka; Tatsuo Fukagawa;藤田理紗;藤田理紗
• 通讯作者: 藤田理紗

Biochemical analysis of the effect of noncoding RNA on the nucleosome

非编码RNA对核小体影响的生化分析

• 发表时间: 2017
• 作者: Tetsuya Hori;Wei-Hao Shang;Masatoshi Hara;Mariko Ariyoshi;Yasuhiro Arimura;Risa Fujita; Hitoshi Kurumizaka; Tatsuo Fukagawa;藤田理紗;藤田理紗;藤田理紗;藤田理紗;藤田理紗;藤田理紗;Risa Fujita
• 通讯作者: Risa Fujita

非コードRNAがヌクレオソームに直接与える影響の生化学的解析

非编码RNA对核小体直接影响的生化分析

• 发表时间: 2018
• 作者: Tetsuya Hori;Wei-Hao Shang;Masatoshi Hara;Mariko Ariyoshi;Yasuhiro Arimura;Risa Fujita; Hitoshi Kurumizaka; Tatsuo Fukagawa;藤田理紗
• 通讯作者: 藤田理紗