新規ＩＦＮ－γ産生γδＴ細胞サブセットの解析

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採用1年度ではBcl11b条件的欠損マウスを用いて、Bcl11b非依存性IFN-γ産生γδT細胞を同定し、Cell Reportsに発表した。マウスTCRγ鎖遺伝子座には７種類の可変（Vγ）遺伝子が存在し、Bcl11b依存性IL-17A産生γδT細胞はVγ6もしくはVγ4陽性γδT細胞であるが、今までVγ6鎖を直接認識する抗体が存在せず、Vγ6γδT細胞の詳細な解析が不可能であったため、Vγ6γδT細胞受容体に対する抗原および抗原認識による生体防御機構は未だに不明である。そこで当該年度では、マウスVγ6鎖特異的なモノクローナル抗体の作製を試みた。Vγ4/Vγ6欠損マウスにVγ6の超可変領域（CDR1, CDR2）のリコンビナントペプチドで免疫し、その後腸骨リンパ節を採取しミエローマ細胞と細胞融合を行いハイブリドーマを1600以上作製し、Vγ6/Vδ1もしくはVγ5/Vδ1遺伝子を導入したTG40細胞株を用いた抗体染色によるスクリーニングにより、Vγ6/Vδ1遺伝子を導入したTG40細胞株のみ染色可能な抗Vγ6モノクローナル抗体を産生する3つのハイブリドーマの作製に成功した。作製した抗Vγ6抗体は、Vγ6γδT細胞が多く占める野生型マウスのVγ1－Vγ4－γδT細胞を陽性に染色でき、Vγ4/Vγ6欠損マウスでは染色されないことが確認できた。生後0日目の胸腺を抗Vγ6抗体で免疫染色した結果、Vγ6γδT細胞は胸腺髄質上皮細胞（mTEC）と共局在していることが明らかとなり、Vγ6γδT細胞の分化にmTECが関与している可能性が示唆された。さらに、抗Vγ６抗体を投与したマウスにK. pneumoniae を感染させた結果、アイソタイプ抗体投与群と比べて有意に死亡し、作製した抗Vγ6抗体の投与は感染防御におけるVγ6γδT細胞の機能を解析する方法として有用であることがわかった。