一過性発現法を用いた希少さび病菌由来エフェクター候補遺伝子の探索

利用瞬时表达法寻找稀有锈菌的效应候选基因

• 批准号: 21K19110
• 负责人: 平塚 和之
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Yokohama National University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-07-09 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K19110/
• 关键词: 一過性発現系; アグロバクテリウム法; 発光レポーター; 植物病原菌; さび病菌; 一過性発現; エフェクター; ゲノム解析; 一過的発現解析

前年度までに進展させた白色96穴多穴プレートを用いた一過的評価・実験系にさらなる改良を加え、384穴多穴プレートを用いた系においても、アグロバクテリウム法による一過性発現系が実施可能となった。具体的には使用するアグロバクテリウムの培養時の処理方法（温度、濃度など）について最適条件を模索した。これにより、スループットは大幅に向上し、エフェクター活性の実験にも使用可能となった。また、前年度に見出されていた、ジャスモン酸メチルアゴニスト（N-[5-(Trifluoromethyl)pyridin-2-yl]benzenesulfonamide）とは異なる新規低分子化合物が、一過性発現効率のエンハンサーとして合成化合物ライブラリーから見出された。ウクライナ危機の影響で、当該化合物の追加購入が難航し、これまでの所十分な特徴づけには至っていないが、研究費が得られれば受託合成サービス等を用いて対応するか、類似化合物を新規購入することなどが考えられる。一方、メダケ赤衣病菌（Stereostratum corticioides)の冬胞子堆からの核酸抽出法については、低分子化の回避よりもDNA抽出効率を重視し、全ガラス製のポッター式ホモジナイザーをゴム製ジョイントで電動モーターに連結して使用することとし、破砕液に対して、フェノールクロロホルム抽出操作の前に、プロテイナーゼKを高濃度SDS存在下で作用させる方法が有効であることが判明した。

In the past year, the development of white 96-hole multi-hole selection system has been improved, and the transient occurrence system of 384-hole multi-hole selection system has been implemented. The specific method of treatment (temperature, concentration) during culture is to simulate the optimum conditions. This is a great way to improve the quality of your products. In the previous year, new low molecular weight compounds (N-[5-(Trifluoromethyl)pyridin-2-yl]benzenesulfonamide) were found, and the transient occurrence rate of synthetic compounds (N-[5-(Trifluoromethyl)pyridin-2-yl]benzenesulfonamide) was found in the previous year. The impact of the crisis, when the additional purchase of the compound is difficult to navigate, the characteristics of the compound, the research cost, the commissioned synthesis, etc., the new purchase of similar compounds, etc. On the one hand, the nucleic acid extraction method from the winter spore pile of Stereostrum corticioides has focused on the avoidance of low molecular weight and the efficiency of DNA extraction. The full-scale pocket-type monitor is connected to the electric monitor on the on-board manufacturing platform. It is convenient to use the broken liquid and before the extraction operation of the cockroach. The method of determining the effect of K in the presence of SDS at high concentrations is useful.