遺伝子銃を用いた病原体感染シグナル伝達機構に関する研究

利用基因枪研究病原体感染信号转导机制

• 批准号: 11876011
• 负责人: 平塚 和之
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11876011/
• 关键词: 遺伝子銃; シグナル伝達; 植物病理学

これまでの研究で、ホタルルシフェラーゼ遺伝子(LUC)をレポーターとして用い、形質転換植物あるいは培養細胞を用いた、タバコ病原関連遺伝子PRlaの発現誘導を検出する系を確立している。しかし、これらの形質転換体を用いた系では多種類のプラスミドDNAを同時に導入する必要がある実験を行うことが極めて困難で、転写活性化実験等には適していない。そこで、遺伝子銃によりプラスミドDNAを直接導入し、高感度な遺伝子発現検出系であるウミシイタケルシフェラーゼ(Renilla luciferase)を用いたDual Luciferase Assayによる一過性遺伝子発現解析の実験系について検討した。この実験系ハプロトプラストの調製や、大量のプラスミドDNA精製が不要で、極めて簡便に遺伝子発現実験を実施できる等の利点がある。本研究ではタバコBY-2細胞を用いて、サリチル酸処理や、PR1活性化因子を発現するプラスミドDNAの導入などによるPRlaの発現の変化を解析した。その結果、シロイヌナズナ由来の誘導抵抗性強化遺伝子のゲノムDNA断片を導入し、CaMV35Sプロモーターで発現させることにより、PRlaプロモーター制御下のLUC遺伝子の活性化が認められた。この結果から、一過性実験によっても、当初望まれていたような発現誘導実験が可能であることが示され、今後の研究を展開する上で、非常に有意義な知見を得ることが出来た。さらに、大気圧中で遺伝子導入実験が可能なハンドヘルド型遺伝子銃を用いた高等植物用遺伝子導入系の最適化を試み、良好な実験条件を設定することが出来た。

This study aims to establish a system for the induction of the expression of pathogen-associated vector PRla in cultured cells using morphologically transformed plants and in cultured cells using genetically modified plants. It is necessary to introduce multiple kinds of DNA simultaneously, which is extremely difficult to write and activate. The analysis of transient gene expression by Dual Luciferase Assay was conducted in the detection system of high sensitivity gene expression by direct introduction of DNA into the system. The advantages of this technology are: high quality, high quality, high purity, and easy to implement. In this study, we analyzed the expression of PRla in vitro, in vivo and in vivo in vitro BY-2 cells treated with citric acid and PR1 activating factors. The results showed that the induction of resistance-enhancing genes from the genome was necessary for DNA fragment introduction, CaMV35S gene expression was necessary for gene expression, and the activation of LUC genes under the control of PRla gene expression was recognized. The results are transient, the results are interesting, the results are interesting. In addition, it is possible to optimize the introduction system of gene for higher plants by using the gene transfer system in high pressure medium, and the optimal conditions are set.

项目成果

Ogata et al.: "Mutational analysis of the signal for a naclean localization…"Plant Cell Reports. 19. 101-105 (1999)

Ogata 等人：“naclean 定位信号的突变分析……”植物细胞报告 19. 101-105 (1999)。