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光応答性遺伝子群の転写制御ネットワークに関する研究

光响应基因转录控制网络的研究

基本信息

批准号：
11151221
负责人：
平塚和之
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11151221/
关键词：
シロイヌナズナ DNA結合タンパク質転写制御

项目摘要

「研究経過」1.GTR-1およびGTR-2と命名した新規GTボックス結合タンパク質の完全長cDNAを単離、各クローンの発現パターンの解析を行った。2.GTR-1とGTR-2の大腸菌組換えタンパク質あるいは in vitroの翻訳産物を用いたゲルシフトアッセイによるDNA結合特異性の解析、GFP融合タンパク質を用いた核移行活性の解析を行った。3.遺伝子銃を用いた一過性発現による遺伝子発現解析系について検討し、それを用いてGTR-1、GTR-2およびGT-1の転写制御因子としての性状解析を試みた。4.新規なtrihelix型のGTボックス結合タンパク質を探索し、シロイヌナズナから新たに2種類を見いだした。「結果・考察」1.ゲノムDNA配列情報と、5'RACE法および3'RACE法により、シロイヌナズナcDNAからGTR-1GTR-2の完全長のcDNAを単離した。両タンパク質ともGT-2などの2カ所のtrihelix領域をもつタイプのGTボックス結合タンパク質とは異なりDNA結合領域は1カ所で、GTR-1の予想されるアミノ酸配列はGT-1と高い相同性を示した。特にtrihelix領域の相同性が高いことから、GT-1と類似したDNA配列を認識結合する可能性が示唆された。一方、GTR-2はアミノ酸配列の相同性がGT-1、GT-2のどちらもそれほど高い相同性は示さず、1ヶ所のtrihelix領域をもつ新たなGTボックス結合タンパク質のサブグループを形成するものと考えられた。2.シロイヌナズナのデータベースから検索した2種類の塩基配列情報にもとづき、2種類のGT-1に類似するDNA結合ドメインを持つタンパク質をコードするcDNAをクローン化し、それぞれGTR1、GTR2と命名した。組織特異性をGT-1と比較するためにRT-PCR法を用いて調べたところ、GTR1とGTR2は調査した全ての組織から検出されたが、それぞれ花芽と花でmRNAの蓄積が多かった。GT-1は花器官でのmRNAの発現が低いことが明らかとなった。3.GTR2については組換えタンパク質を用いてDNA結合活性について検討し、エンドウRBCS-3AプロモーターのBoxIIおよびBoxIII、タバコPrlaプロモーター等を用いたゲルシフトアッセイで、GT-1と異なる結合特異性を示すことを明らかにした。

1. GTR-1, GTR-2 and GTR-2 are named in the new rules. The GTR-1, GTR-2 and GTR-1 are named in the new rules. 2. Analysis of DNA binding specificity and nuclear migration activity of GTR-1 and GTR-2 in Escherichia coli and GFP fusion in vitro. 3. The analysis of gene expression in the transient occurrence of gene expression in the middle of gene expression was carried out in the middle of gene expression analysis, and the control factors of gene expression in GTR-1, GTR-2 and GT-1 were used in gene expression analysis. 4. The new trihelix type GT is combined with the new type of GT to explore the new type. 1. DNA alignment information, 5'RACE method and 3'RACE method are used to isolate complete cDNA of GTR-1GTR-2. The trihelix domain of GTR-2 and GTR-1 is expected to be identical to GT-1. In particular, trihelix domain identity is high, GT-1 is similar to DNA alignment, and the possibility of cognitive binding is demonstrated. The identity of the acid sequence of GT-1 and GT-2 is different from that of GT-1 and GT-2. The identity of GT-1 and GT-2 is different from that of GT-1 and GT-2. The trihelix domain of GT-1 and GT-2 is different from that of GT-1 and GT-2. 2. DNA binding sites for GTR1 and GTR2 are similar to those for GT-1. Tissue-specific RT-PCR was used to investigate the expression of mRNA in all tissues and flower buds. GT-1 mRNA expression in floral organs is low. 3. GTR2 is used to detect DNA binding activity, such as RBCS-3A, Box II, Box III, GT-1, and binding specificity.