光応答性遺伝子群の転写制御ネットワークに関する研究

光响应基因转录控制网络的研究

• 批准号: 10170222
• 负责人: 平塚 和之
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10170222/
• 关键词: シロイヌナズナ; GT-1; 情報伝達

1. シロイヌナズナGT-1の組換えタンパク質を用いて、GT-1のリン酸化について検討した。その結果、GT-1はCalcium/calmodulin kinase II(CaMKII)とCasein kinase II(CKII)によってリン酸化されることが明らかとなった。CaMK IIによるリン酸化ではDNA結合活性の上昇が観察され、そのリン酸化部位はT133であった。さらに、予想されるGT-1のリン酸化部位は6カ所であるが、それらのセリンあるいはスレオニン残基をアスパラギン酸に置換させる点変異を導入した場合、T133Dの変異導入に於いてのみ、明瞭なDNA結合活性上昇が認められた。これまでに、in vitroでGT-lが結合するエンドウRBCS-3AプロモーターのBoxIIはCalcium/calmodulinを介した光情報伝達経路の末端であることを示す結果が得られているが、以上の結果はGT-1がin vivoでBOXIIに結合し、光情報伝達系の転写因子として働いている可能性を示唆している。2. シロイヌナズナのデータベースから検索した2種類の塩基配列情報にもとづき、2種類のGT-1に類似するDNA結合ドメインを持つタンパク質をコードするcDNAをクローン化し、それぞれGTRl、GTR2と命名した。組織特異性をGT-1と比較するためにRT-PCR法を用いて調べたところ、GTRlとGTR2は調査した全ての組織から検出されたが、それぞれ花芽と花でmRNAの蓄積が多かった。これに対してGT-1は花器官でのmRNAの発現が低いことが明らかとなった。3. GTR2については組換えタンパク質を用いてDNA結合活性について検討し、エンドウRBCS-3AプロモーターのBoxIIおよびBoxIII、タバコPRlaプロモーター等を用いたゲルシフトアッセイで、GT-1と異なる結合特異性を示すことを明らかにした。

1. シ ロ イ ヌ ナ ズ の ナ GT - 1 set in え タ ン パ ク qualitative を with い て, GT - 1 の リ ン acidification に つ い て beg し 検 た. は そ の results, GT - 1 Calcium/calmodulin kinase II (CaMKII) と Casein kinase II (CKII) に よ っ て リ ン acidification さ れ る こ と が Ming ら か と な っ た. CaMK II に よ る リ ン acidification で は DNA binding activity の rise が 観 examine さ れ, そ の リ ン acidification parts は T133 で あ っ た. さ ら に, to want to さ れ る GT - 1 の リ ン は acidification parts by 6 カ で あ る が, そ れ ら の セ リ ン あ る い は ス レ オ ニ ン residues を ア ス パ ラ ギ ン acid に replacement さ せ る points - different を import し た occasions, T133D の - different import に in い て の み, clear な DNA binding activity rise が recognize め ら れ た. こ れ ま で に, the in vitro で GT -l が combining す る エ ン ド ウ RBCS - 3 - a プ ロ モ ー タ ー の BoxII は Calcium/calmodulin を interface し た light intelligence 伝 da 経 の end で あ る こ と を shown the result of す が ら れ て い る が が は GT - 1, the above の results in Vivo で BOXII に し, light intelligence 伝 da is の planning write factor と し て 働 い て い を る possibility in stopping し て い る. 2. シ ロ イ ヌ ナ ズ ナ の デ ー タ ベ ー ス か ら 検 cable し た 2 kinds の salt base with column intelligence に も と づ き, 2 species の に similar GT - 1 す る dna-binding ド メ イ ン を hold つ タ ン パ ク qualitative を コ ー ド す る cDNA を ク ロ ー ン し, そ れ ぞ れ GTRl, GTR2 と named し た. Tissue specificity と を GT - 1 more す る た め に を rt-pcr method with い て adjustable べ た と こ ろ, GTRl と GTR2 は survey し た full て の organization か ら 検 out さ れ た が, そ れ ぞ れ flower bud と flower で mRNA の accumulation が more か っ た. Youdaoplaceholder3 れに shows が low <s:1> とが とが mRNA <e:1> in the てGT-1 <s:1> floral organ ら ら となった となった. 3. GTR2 に つ い て は group in え タ ン パ ク qualitative を with い て DNA binding activity に つ い て beg し 検, エ ン ド ウ RBCS - 3 - a プ ロ モ ー タ ー の BoxII お よ び BoxIII, タ バ コ PRla プ ロ モ ー タ ー い を in た ゲ ル シ フ ト ア ッ セ イ で と vision, GT - 1 な る combining specific を shown す こ と を Ming ら か Youdaoplaceholder0 た.

项目成果

Ogata, S.et al.: "Mutational analysis of the signal for a nuclear localization of proteins〜" Plant Cell Reports. (in press). (1999)

Ogata, S. 等人：“蛋白质核定位信号的突变分析〜”植物细胞报告（正在出版）。

Marechal, M.et al.: "Modulation of GT-1 DNA binding activity by Calcium dependent phosphorylation" Plant Molecular Biology. (in press). (1999)

Marechal, M.等人：“通过钙依赖性磷酸化调节 GT-1 DNA 结合活性”植物分子生物学。