The development of methods to control enzyme activity using protein-protein splicing and virus-like particles

开发利用蛋白质-蛋白质剪接和病毒样颗粒控制酶活性的方法

• 批准号: 21K19397
• 负责人: 小野寺 康仁
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-07-09 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K19397/
• 关键词: タンパク質トランススプライシング; ウイルス様粒子; 酵素活性制御; 薬剤耐性遺伝子; タンパク質間スプライシング; 遺伝子治療

本年度は、昨年度に確立した「ウイルス様粒子（virus-like particle, VLP）」へのタンパク質導入をさらに容易にするための新たなシステムの開発に取り組んだ。幾つかの脂質結合ドメインを用いることで目的タンパク質が細胞外小胞に取り込まれることを確認した。またこのとき、VSV-Gなど、ウイルス由来の融合タンパク質を細胞に発現させておくと、任意のタンパク質を含み非常に効率の良い細胞膜融合活性を持ったVLPを作成できることを確認した。目的タンパク質の導入をより効率化するため、当該の脂質結合ドメインに直接的に目的タンパク質を融合させるのではなく、タンパク質結合に関わるドメインおよびその結合配列を介した「間接的な導入」を検討した。これにより、1分子の脂質結合ドメインに対して複数個の目的タンパク質を連結できることが示唆され、VLPにより効率的に目的タンパク質を導入することが可能となった。また、本研究の進行の過程で、細胞あるいはVLPから酵素断片が漏出することによって、細胞外において酵素活性を生じてしまうという問題点が明らかとなった。これは本手法に限らず、あらゆるタンパク質において起こり得ることではあるが、厳密な酵素活性制御を目指す本研究においては無視できない事象である。そこで追加の検討事項として、意図せずに細胞外に漏出した酵素の活性を抑制するための手法の開発を試みた。現時点で、プロトタイプは完成している。上記項目とあわせて論文発表を行うため、研究期間の延長をすべきと判断した。

This year and last year, it is important to ensure that virus-like particle (VLP) is imported into the market. It is easy to make sure that the new information is available. The purpose of this study is to extract the extracellular vesicles from the extracellular cells in order to make sure that they are not available. The reason for this is that the fusion is caused by cell fusion, VSV-G, cell fusion, cell fusion, cell The purpose of this paper is to improve the accuracy of the information system, and when the information is used in combination with the direct purpose of the information system, the purpose of this paper is to improve the accuracy of the information system, and when the information is combined with the direct purpose of the information system, the purpose of this paper is to combine the information information in the information system. The combination of one molecule of fat and one molecule of fat can be used to copy the data of several purposes, such as instigation, VLP, and the rate of instigation. In this study, the process, VLP enzyme fragments, extracellular enzyme activity, enzyme activity, enzyme activity and enzyme activity were studied. The purpose of this study is to control the activity of enzymes in this study. in this study, we do not pay attention to the situation in this study. It is necessary to add additional information on the activities of extracellular trypsin to inhibit the activity of extracellular enzymes in order to start a trial test. At the same time, please make sure that you finish the training session. In the previous project, the literature table was reviewed, and the evaluation was extended during the research period.