ヒト側頭骨病理標本アーカイブを用いた遺伝性難聴の病態解明に関する研究

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先天性難聴は新生児1,000人に1人に認められる比較的頻度の高い疾患である。難聴患者の遺伝子解析を行い、原因遺伝子変異を明らかにすることは、原因診断として臨床上有用であり、保険診療として一般的な検査となってきている。しかしながら、内耳は骨に囲まれた 組織であり、生検が困難であるため、実際のヒト内耳における病理・病態に関してはほとんど明らかとなっていない。本研究は、カリフォルニア 大学ロサンゼルス校(UCLA)耳鼻咽喉科の石山明教授との共同研究により、同大学の管理する世界最大の側頭骨病理標本アーカイブを活用し、ヒト側頭骨病理標 本よりDNAを抽出し、次世代シークエンサー(NGS)を用いた解析を行い、原因遺伝子変異を明らかにすることで、遺伝性難聴の病理・病態を明らかにすることを 目的としている。本年度は前年度までの研究を継続し、UCLAの管理する世界最大の側頭骨病理標本アーカイブからセロイジン包埋ヒト側頭骨病理標本を送付し、信州大学でセロイジ ン包埋ヒト側頭骨病理標本からDNA抽出するためのプロトコール開発を進めた。具体的にはエタノール/ジエチルエーテル混和物で1週間程度溶解した後にエタノーエルで複数回洗浄しDNAを抽出するプロトコルを確立した。得られたDNAを基に次世代シークエ ンサー(NGS)解析用のライブラリの調整を行い、得られたライブラリを用いて次世代シークエンス解析を行った。その結果、複数の候補となるバリアントを検出することができた。現在、見出されたバリアントの病的意義に関して検討をおこなっている。