ヘマグルチニンの抗原性多様化に対応可能なカクテル型インフルエンザワクチンの開発

开发可响应血凝素抗原多样化的鸡尾酒流感疫苗

基本信息

批准号：
22K10517
负责人：
後川潤
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kawasaki Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

インフルエンザは、人々の健康だけでなく社会活動にも影響を及ぼす深刻な感染症である。A型インフルエンザウイルスは、ウイルス表面タンパク質であるヘマグルチニン（hemagglutinin:HA）とノイラミニダーゼ（neuraminidase:NA）の種類によって亜型に分類される。A型株である2009年パンデミック型（H1N1pdm亜型）と香港型（H3N2亜型）のうち、香港型ウイルスは抗原変異頻度が特に高いため、流行株を予測して適切なワクチン株を選定することは難しい。殊に国内で承認されているインフルエンザワクチンは、その防御効果が主要抗原タンパク質であるHAの抗原性に左右される側面が大きく、ワクチン株と市中流行株の抗原相同性がずれた場合、ワクチンとしての有益性が損なわれる。本研究では抗原性のズレに対応できるHAワクチンへの改良を目的として、HAの主要抗原部位のアスパラギン結合型（N型）糖鎖に着目してN型糖鎖プロファイル（組合せと数）と抗原性との関係を明らかにし、抗原カクテル化によるHAワクチンの改良とその有効性を検証した。本年度は以下の実験を遂行した。①主要抗原部位のN型糖鎖プロファイルが異なるように設計したHA遺伝子を組み込んだプラスミドを構築し、HEK293T細胞に導入してリコンビナントHAタンパク質（rHA）を発現させた。②免疫沈降法で回収したN型糖鎖プロファイルが異なる3種類のrHAを混ぜてカクテルHA抗原とし、モルモットに免疫した。③得られた抗血清を用いて赤血球凝集抑制試験等を行い、単一HA抗血清とカクテルHA抗血清の性能を比較検証した。その結果、カクテルHA抗原によって得られた抗血清は、単一HA抗原によって得られた血清よりも広域かつ強い中和活性を示す傾向が認められた。

流感是一种严重的传染病，不仅影响人们的健康，而且影响社会活动。流感A病毒通过病毒表面蛋白血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）的类型分类为亚型。在2009年的A型菌株（H1N1PDM亚型）和香港（H3N2亚型）中，香港病毒具有特别高的抗原突变频率，使得难以预测流行病并选择适当的疫苗菌株。尤其是，在日本批准的流感疫苗的保护作用的主要方面取决于HA的抗原性，主要的抗原蛋白，并且如果疫苗菌株的抗原性同源性和商业上活性菌株的抗原性同源性是不同的，则其作为疫苗的有用性会受到损害。在这项研究中，我们专注于HA的主要抗原位点的天冬酰胺结合（N型）糖链，并揭示了N型糖链剖面（组合和数量）与抗原性之间的关系，并通过抗原鸡尾酒及其有效性测试了HA疫苗的改善。今年，我们进行了以下实验：1）构建了一个质粒，该质粒结合了HA基因，该基因旨在在主要的抗原位点具有不同的N型聚糖谱，然后被引入HEK293T细胞中以表达重组HA蛋白（RHA）。 2）将三种类型的RHA混合在一起，具有不同的N型聚糖剖面，将免疫沉淀回收的含量混合以形成鸡尾酒HA抗原，并免疫豚鼠。 ③使用所获得的抗血清进行了血凝抑制测试，并比较并验证了单个HA抗血清和鸡尾酒HA抗血清的性能。结果，与单个HA抗原获得的血清相比，鸡尾酒HA抗原获得的抗血清往往表现出更广泛，更强的中和活性。