ヒストンの受け渡し活性測定系の開発から探索するヒストンリサイクルの分子機構

通过开发组蛋白递送活性测量系统探索组蛋白回收的分子机制

• 批准号: 22K06210
• 负责人: 日詰 光治
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Saitama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06210/
• 关键词: DNA複製; ヌクレオソーム; クロマチン; ヒストン; 複製

DNA複製に伴い、鋳型鎖ヒストンを新生鎖で再利用するヒストンリサイクルが行われる。本研究ではヒストンリサイクルの生化学的再構築を目指す。とりわけ、（１）鋳型鎖からヒストンを受け取って保持し、（２）そのヒストンを新生鎖のヌクレオソーム形成に供する、という二つのステップを各々測定するアッセイ系を開発することを目指す。まず、ヒストンシャペロンと考えられている複製ヘリカーゼ複合体のサブユニットMcm2のN末端領域（ここではMcm2Nとよぶ）を、任意のDNA領域に固定する手法の確立を目指した。いくつかの方法を試した結果、最終的に、Mcm2NをLexAとの融合タンパク質として精製して、SOS-Box領域をもつDNAと結合させることで、安定に領域特異的なDNA-Mcm2N結合を確立した。来年度以降は、この系を用いて、Mcm2Nを固定したDNA領域周辺に対するヒストンローディング（すなわちヌクレオソーム形成）について、検討する。Mcm2Nは複製フォークの進行の方向において、もっとも前方に位置するため、解離した鋳型鎖ヌクレオソームから放出されたヒストンに最も初期にアクセスすると考えられる。Mcm2Nが捕捉したヒストンは、より新生鎖に近接する複製フォーク後方の因子に受け渡され、最終的に新生鎖に結合すると考える。したがって、Mcm2Nが結合したヒストンタンパク質をどの因子に受け渡すか、生化学的な競合実験で試した。Mcm2Nとヒストンとを結合させておき、そこにDpb3-Dpb4などのヒストンシャペロン複製因子を加える実験を行っている。これまでに、加える因子依存的に、Mcm2Nとヒストンとの結合が促進／阻害される様子が予備的に検出されているため、来年度以降、さらに詳細な解析を進める。

DNA replication is associated with the formation of new locks and reuse of new locks. The aim of this study is to provide an indication for the biochemical reconstruction of the tumor. (1) The lock is opened and maintained,(2) The lock is opened and maintained,(3) The lock is opened and maintained,(4) The lock is opened and maintained,(5) The lock is opened and maintained, and (6) The lock is opened and maintained. The N-terminal domain of Mcm2 and the method of immobilizing any DNA domain are indicated. The results of the test, the final results, the Mcm2N LexA fusion, the quality refinement, the SOS-Box domain DNA binding, and the stability of the domain-specific DNA-Mcm2N binding were established. In the coming years, Mcm2N will be immobilized in the DNA domain. Mcm2N is the first to release a lock in the direction in which the lock proceeds, and the first to release a lock in the direction in which the lock proceeds. Mcm2N captures the new lock, replicates the new lock, and finally combines the new lock. Mcm2N is a combination of chemical and biological factors. The combination of Mcm2N and XSTONEN will continue to be implemented, and the replication factors of XSTONEN from Dpb3 to Dpb4 will be added. For example, if a factor is dependent on a factor, Mcm2N is dependent on the factor, and the factor is dependent on the factor, Mcm2N is dependent on the factor, and the factor is dependent on the factor, Mcm2N is dependent on the factor.