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Analysis of innate immune response of alveolar macrophages and epithelial-mesenchymal transition of alveolar epithelial cells

肺泡巨噬细胞的先天免疫反应和肺泡上皮细胞的上皮间质转化分析

基本信息

批准号：
22K06698
负责人：
高野幹久
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

肺胞内には様々な免疫応答システムが存在し，特にマクロファージは重要な役割を担っている。本研究では，肺胞マクロファージの自然免疫応答について，バクテリア由来ペプチドの細胞内取り込みに関わるペプチドトランスポーターPEPT2との関係を中心に解析することを第一の目的とした。また，バクテリアの感染による炎症は間質性肺炎や肺線維症へと進行する危険性があり，その過程には肺胞上皮細胞の上皮間葉転換が関与する可能性がある。そこで肺胞マクロファージから分泌される液性因子と肺胞上皮細胞の上皮間葉転換の関係について解析することを第2の目的とした。令和4年度の成果は以下のとおりである。1）ラット肺胞マクロファージを用いた検討ラット肺から単離した肺胞マクロファージにおいてPEPT2のmRNA発現を確認した。またWestern blottingによりPEPT2タンパク質の発現も確認した。さらに，PEPT2基質である蛍光標識ペプチドβ-Ala-Lys-AMCA を用い，β-Ala-Lys-AMCA取り込みのpH依存性やPEPT2阻害剤による取り込み阻害効果から，肺胞マクロファージにおいてPEPT2が機能していることを見出した。２）ラット肺胞マクロファージ由来培養細胞NR8383を用いた検討実験動物数を抑えるため，次にNR8383細胞を用いて同様の検討を進めた。その結果，NR8383細胞においてもPEPT2のmRNAおよびタンパク質が発現していること，β-Ala-Lys-AMCAのNR8383細胞内への取り込みはPEPT2を介することを明らかにするとともに取り込み特性の解析を進めた。従って，NR8383細胞は，肺胞マクロファージにおけるPEPT2の発現・機能解析に有用な培養細胞と考えられた。

In the lung, the immune response is very important. This study aims to analyze the relationship between the natural immune response of lung cells and the intracellular selection of PEPT2. Inflammation and interstitial pneumonia may be related to the development of pulmonary vascular disease, and the process may be related to epithelial mesenchymal turnover of pulmonary epithelial cells. The second goal is to analyze the relationship between the secretory factors secreted by lung cells and the epithelial-mesenchymal turnover of lung epithelial cells. The results of the fourth year are as follows: 1) The expression of PEPT2 mRNA was confirmed by PCR. Western blotting was performed to confirm the presence of PEPT2. In addition, PEPT2 matrix can be identified by the use of β-Ala-Lys-AMCA, β-Ala-Lys-AMCA and PEPT2 inhibitors. 2) Cell culture NR8383 cell culture As a result, the expression of PEPT2 mRNA and protein in NR8383 cells was detected, and the analysis of PEPT2 mRNA and protein characteristics in β-Ala-Lys-AMCA and NR8383 cells was further investigated. However, NR8383 cells were cultured and tested for the discovery and functional analysis of PEPT2 in lung cells.