メガリン(gp330)の分子・細胞生物学的解析と新規薬物送達システム開発への応用

巨蛋白（gp330）的分子和细胞生物学分析及其在新型给药系统开发中的应用

• 批准号: 09877425
• 负责人: 高野 幹久
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877425/
• 关键词: メガリン; カルシウム結合蛋白; エンドサイトーシス; アルブミン; アミノグリコシド; 培養腎上皮細胞

メガリンは、腎尿細管上皮細胞の管腔側に多く発現している約600kDの膜蛋白であり、様々な物質を結合し、エンドサイトーシスによって細胞内に取り込むことが知られている。基質として、アプロチニンやアミノグリコシド(AG)等のカチオン性物質やアルブミンのようなアニオン性物質を認識すると言われているが詳細は不明である。本研究では、メガリンの発現が報告されているラット卵黄嚢がん由来L2細胞及び培養腎上皮細胞(LLC-PKl,OK)を用い、アルブミンやAG系抗生物質アミカシン(AMK)の取り込み特性を解析し、メガリンとの関係を考察した。メガリンはカルシウム結合蛋白としても働くため、L2細胞におけるメガリン発現を^<45>Ca^<2+>によるオートラジオグラフィーにより検討したところ、高分子蛋白領域にメガリンと推定されるバンドが検出された。上記3種の細胞を用い、アルブミンの取り込みを解析したところ、レセプター介在性エンドサイトーシスの特性を示したが、他のメガリン基質で影響されず、別のレセプターの関与が示唆された。次に、L2細胞におけるAMKの取り込みを検討したところ、レセプター介在性エンドサイトーシスの特性を示し、他のアミノグリコシド共存で阻害された。また、メガリンと基質の結合はカルシウム依存性であることが知られているが、L2細胞膜に対するAMKの結合もカルシウム依存性を示した。従って、L2細胞におけるAGの取り込みには、メガリンが関与するものと推察された。さらに、高濃度のAG共存下、^<45>Ca^<2+>オートラジオグラムのバンドが減弱したことから、in vivoで報告されているカルシウムとAGの相互作用に、メガリンが関与する可能性が示唆された。これと並行して、腎皮質内のメガリン量が変化すると考えられる腎障害時の薬物(AG等)腎挙動についても解析を進めている。

The membrane protein of about 600kD was found in the luminal side of renal tubule epithelial cells. The details of the matrix, the matrix and the matrix are unclear. This study reports the development of vitelline from L2 cells and cultured renal epithelial cells (LLC-PKl,OK), and examines the relationship between vitelline and AG antibiotic, AMK. In <45>the field of high molecular protein, the protein binding protein is detected by the protein binding protein of L2 cells. The above three kinds of cells are used in the analysis of the selection center of the cell, and the relationship between the selection center and the selection center of the cell is discussed. In addition, L2 cells were used to study the characteristics of AMK in vitro, and the inhibition of AMK in vitro was also studied. The binding of AMK to L2 cell membrane is dependent on the matrix. The cells in the L2 cell line were isolated from each other. In addition, under the blue shift of AG at high concentration<45>, the possibility of interaction between AG and Ca^&lt;2+&gt; is shown. In addition, the amount of protein in the renal cortex changes, and the protein in the renal cortex changes.

项目成果

Shiraishi, Y.: "Renal organic anion secretion and α-ketoglutarate levels in rats with chronic metabolic acidosis" Pharm.Pharmacol.Commun.4(6). 301-304 (1998)

Shiraishi, Y.：“慢性代谢性酸中毒大鼠的肾脏有机阴离子分泌和 α-酮戊二酸水平”Pharm.Pharmacol.Commun.4(6) 301-304 (1998)。

Kunihara, M.: "Renal excretion of rhodamine 123, a P-glycoprotein substrate, in rats with glycerol-induced acute renal failure" J.Pharm.Pharmacol.50. 1161-1165 (1998)

Kunihara, M.：“甘油诱导的急性肾衰竭大鼠中罗丹明 123（一种 P-糖蛋白底物）的肾排泄”J.Pharm.Pharmacol.50。