硫酸化糖鎖に着目した胆管細胞におけるムチンコアタンパク質の機能解析

胆管细胞粘蛋白核心蛋白的功能分析，重点关注硫酸化糖链

• 批准号: 22K06977
• 负责人: 星野 瞳
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: University of Fukui
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06977/
• 关键词: ムチン; 硫酸化糖鎖; 遺伝子発現ベクター; ウェスタンブロット; 免疫沈降; 肝臓; 糖タンパク質; 肝内胆管; 細胆管反応

本研究の目的は、硫酸化糖鎖で修飾されたムチンコアタンパク質の胆管細胞における機能を明らかにすることである。令和4年度の研究実施計画は、硫酸化糖鎖のコアタンパク質と考えられたムチンXの遺伝子をクローニングして遺伝子発現ベクターを作製すること、さらに細胞株を用いたタンパク質発現解析を行うことであった。当初はムチンX cDNAを複数に分けて遺伝子増幅したのち、それらを連結させることで全長cDNAを入手する予定であった。しかしながら、市販のムチンX遺伝子発現ベクター入手することができたため、このムチンX遺伝子発現ベクターを使用して実験を行うことにした。まず始めに、ムチンX遺伝子発現ベクターに組み込まれたムチンX のオープンリーディングフレーム（ORF）の塩基配列を明らかにするため、シーケンスを用いて塩基配列の同定を行った。その結果、ムチンXのORFの約90%を解読したが、残り約10%の配列は繰り返し配列からなるタンデムリピート構造を含んでいることからプライマーが非特異的に結合し、シーケンスを困難にしている。次いでムチンXタンパク質の発現を確認するため、硫酸化糖鎖を発現するように遺伝子改変した細胞株および改変前の細胞株にムチンX遺伝子発現ベクターを遺伝子導入し、細胞破砕液から調製した総タンパク液と細胞培養上清を用いてウェスタンブロットを行った。ムチンXに結合させたタグに対する抗体でウェスタンブロットを行ったところ、総タンパク液から抗タグ抗体で検出されるバンドが確認されたが、タンパク質発現量が低かったことから、実験の条件の変更を行っている。免疫沈降に関しては、条件検討を重ねている。

The purpose of this study is to determine the quality and function of bile duct cells modified by sulfated sugar locks. Reiwa 4th year research and implementation plan, sulfated sugar lock noun The して缝子発成ベクターをproduces the すること, and the さらに cell line is used for the いたタンパクquality発行うことであった. At the beginning, the full-length cDNA of the はムチンX cDNA を plural けて 伝子 annexed したのち and the それらをconnected させることで full-length cDNA was ordered.しかしながら、market のムチンため、このムチンX伝子発 appear ベクターを Use して実験を行うことにした.まず开めに、ムチンORF (ORF) ORFかにするため、シーケンスを Use いて婩婩综合の同定を行った.そのRESULTS, ムチンデムリピートstructuralをcontainingんでいることからプライマーがnon-specific bindingし、シーケンスをdifficultyにしている. Sub-いでムチンThe cell strain of the current するように伝子changed the 変した cell line およびchanged the 変前のcell line にムチンX-ray tube is introduced and the cell-breaking solution is prepared. The タンパク liquid and the cell culture supernatant were prepared using いてウェスタンブロットを行った.ムチンブロットを行ったところ, 総タンパク Liquid からanti-タグ antibodyで検出されるバンドがConfirmationされたが、タンパクquality発真人がlowかったことから、実験のconditionsの変changeを行っている. Immunosedimentation is a good thing, and the condition is a heavy one.

项目成果

Establishment of human ovarian cancer-derived cell lines

人卵巢癌来源细胞系的建立

• 发表时间: 2022
• 作者: Hitomi Hoshino;Daisuke Inoue;Tomoya O Akama;Motohiro Kobayashi
• 通讯作者: Motohiro Kobayashi

Expression and Clinical Significance of Spi-B in B-cell Acute Lymphoblastic Leukemia

Spi-B在B细胞急性淋巴细胞白血病中的表达及临床意义

• DOI: 10.1369/00221554221130383
• 发表时间: 2022
• 期刊: J Histochem Cytochem
• 影响因子: 3.2
• 作者: Yuzuru Ariga;Shulin Low;Hitomi Hoshino;Tsutomu Nakada;Tomoya O Akama;Akifumi Muramoto;Mana Fukushima;Takahiro Yamauchi;Yusei Ohshima;Motohiro Kobayashi
• 通讯作者: Motohiro Kobayashi

Sulfated Glycans Recognized by S1 Monoclonal Antibody can Serve as a Diagnostic Marker for Malignant Pleural Mesothelioma

S1 单克隆抗体识别的硫酸聚糖可作为恶性胸膜间皮瘤的诊断标志物

• DOI: 10.1007/s00408-022-00531-4
• 发表时间: 2022
• 期刊: Lung
• 影响因子: 5
• 作者: Koki Nakashima;Yasuhiro Sakai;Hitomi Hoshino;Yukihiro Umeda;Hiroto Kawashima;Yoshitaka Sekido;Tamotsu Ishizuka;Motohiro Kobayashi
• 通讯作者: Motohiro Kobayashi