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Analysis of the mechanism of acquisition of anticancer drug resistance using gastrointestinal cancer organoids

胃肠道肿瘤类器官获得抗癌耐药性的机制分析

基本信息

批准号：
22K07013
负责人：
坂本直也
金额：
$ 2.08万
依托单位：
National Cancer Center Japan
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07013/
关键词：
オルガノイド抗がん剤耐性胃がん大腸がん消化管がん

项目摘要

オルガノイドはin vitroで幹細胞の維持を可能にし、組織の最小構成単位を培養する手法であり、細胞の分化を確認でき、微小環境の変化に応じた細胞群の形質変化をモデル化できる。申請者は、がん組織が抗がん剤耐性を有する細胞群を生み出すメカニズムの解明を目的とし、Super-enhancerと呼ばれる、細胞の運命決定に大きく寄与するエンハンサー領域の集合体に焦点を当てて解析を行う。抗がん剤耐性を獲得させた消化管がんオルガノイドを用いて、ChIP-sequenceや遺伝子発現解析を行うことで、がんの最小構成単位における抗がん剤耐性細胞へのSuper-enhancerの寄与や、Super-enhancerの活性化に付随して発現する遺伝子の機能を明らかにする。抗がん剤耐性を有する細胞群を生み出す根本的なメカニズムの詳細の解明は、抗がん剤耐性の克服に貢献する基盤データとして重要な意義があると考える。本年度は胃がんオルガノイド3例、大腸がんオルガノイド3例における5-FU, オキサリプラチンへの感受性をcell viability assayで検討し、IC50値を算出した。IC50値を基準として、添加する抗がん剤の濃度を複数の条件で検討し、各々のオルガノイドが生存可能な最も高い濃度を同定した。同一サンプルにおいて、生存可能な最高濃度における培養下で継代を続け、IC50の２倍の濃度で培養が維持可能なるまでの維持を続け、それぞれの継代時のサンプルを凍結保存を行った。また比較対象として、胃がん細胞株(MKN-45, MKN-74)、大腸がん細胞株(DLD-1, HT-29)に対しても同様の処理を行い、IC50の算出の後に、継代培養後の凍結サンプルを保存した。

Stem cell maintenance is possible in vitro, tissue culture is possible in minimal units, cell differentiation is confirmed, microenvironment transformation is possible, and cell population transformation is possible in vitro. The applicant shall, in the case of tissue resistance and tolerance, produce a population of cells, determine the purpose, Super-enhancer and call, and determine the fate of the cells. Anti-drug resistance is acquired in the digestive tract, and the function of ChIP-sequence and gene expression is clarified. A detailed explanation of the basic mechanism for the development of cell populations with resistance to drugs and their contribution to overcoming resistance to drugs. This year, 3 cases of gastric cancer, 3 cases of large intestine cancer, 5-FU, sensitivity of cell viability assay, IC50 value were calculated. IC50 values are determined by reference, concentration of additive, and multiple conditions. The highest concentration of IC50 in the same culture medium, survival potential, culture potential, maintenance potential, culture potential, maintenance potential, and frozen preservation of the medium. In comparison, gastric cell lines (MKN-45, MKN-74) and colorectal cell lines (DLD-1, HT-29) were treated in the same way, IC50 was calculated, and frozen cells were preserved after subculture.