レンサ球菌高病原化変異株が分泌するaromatic-rich ペプチドの機能解析

高致病性链球菌突变株分泌的富含芳香肽的功能分析

基本信息

批准号：
22K07083
负责人：
竹本訓彦
金额：
$ 2.66万
依托单位：
National Center for Global Health and Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07083/
关键词：
高病原化変異 A群レンサ球菌

项目摘要

SapA1の機能評価を行うため6x His タグを付加したSapA1及び6x His-SapA1の持つ芳香族アミノ酸残基をアラニンに置換した変異体(SapA1Amut)をレンサ球菌で発現させる発現系を構築し、それぞれのペプチドの発現精製に成功した。また、SapA1の発現量変動を検討するため、SapA1に特異的な抗体の作製を行なった。得られた抗体はSapA1を検出するものの、SapA1Amutには反応性を示さず、特異的な抗体が得られていることを確認できた。得られた抗体を用いて、同一患者由来の臨床分離株であるCovS変異体とCovS野生型の２株の培養上清に含まれるSapA1の量を検討したところ、CovS変異体でのみシグナルが検出された。CovS変異は高病原化を伴うことが知られており、SapA1の過剰産生が高病原化の一因である可能性が示された。一方、emm1型株に特異的に保存されているSapA3については、人工ペプチド合成受託企業に合成を依頼したが、配列上、合成が不可能であるとのことで抗体作製に進むことができていない。予備的解析ではゲノム上の限られた領域にかたまって存在するSap遺伝子群領域の全体を欠損させた株を作製し、病原性解析を行なっていたが、SapA1の詳細な機能解析を進めるため、Sap遺伝子群の中のsapA1遺伝子のみを欠損したsapA1欠損株を作製した。得られた株の増殖速度を野生株、Sap全域欠損株と比較したが、影響は見られなかった。

为了评估SAPA1的功能，构建了一个表达系统，其中突变体（SAPA1AMUT）在该突变体中，SAPA1和6X His-SAPA1的芳族氨基酸残基被丙氨酸代替，并且每个肽的表达和纯化成功。此外，为了研究SAPA1表达水平的变化，制备了针对SAPA1的抗体。尽管获得的抗体检测到SAPA1，但已证实它对SAPA1AMUT没有反应，并且获得了特定的抗体。使用所得抗体，检查了来自同一患者的两个临床分离株和两个COVS野生型菌株的SAPA1量，仅在COVS突变体中检测到信号。已知COVS突变与超人为发生有关，表明SAPA1的生产过多可能有助于超人为发生。另一方面，对于在EMM1菌株中特别保守的SAPA3，我们已要求一家公司委托合成人造肽，但是由于序列，据说不可能合成，因此我们无法继续进行抗体产生。在初步分析中，产生了一个菌株，该菌株的整个SAP基因组区域存在于基因组有限区域，并进行了致病性分析。但是，为了进行SAPA1的详细功能分析，产生了SAPA1缺乏菌株，该菌株仅在SAP基因组中具有SAPA1基因。将所得菌株的生长速率与野生菌株和含有汁液范围的缺陷菌株进行了比较，但未观察到影响。