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上皮化誘導・DNA修復抑制性短鎖RNAと細胞運命制御による難治性癌治療法の創出

利用短链 RNA 诱导上皮化、抑制 DNA 修复并控制细胞命运，创造治疗顽固性癌症的方法

基本信息

批准号：
22K07290
负责人：
吉川清次
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Doshisha Women's College of Liberal Arts
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

がんの転移・浸潤、化学療法耐性、幹細胞特性に関与する上皮間葉転換における創薬標的の探索を進めている。中でも上皮化誘導、脂肪分化誘導、NUMB遺伝子、代謝標的に注目をして研究を進めている。2022年4月に遺伝子組換え実験室が整備され、EMT/MET dual reporter上で、shP1のMET様効果を確認、doxycycline tamoxifenによる遺伝子発現誘導系が働くことを確認した。細胞周期への上皮化、脂肪分化誘導が及ぼす影響を調べるためlentivirus fucci reporterを各種間葉系がん細胞に導入した。脂肪分化誘導による効果の検証を進め、間葉系乳癌細胞株では、上皮化誘導shRNAによるMETは、rosiglitazoneによる脂肪分化誘導 (CD36発現、BODIPY取込能)を抑えることが判明した。癌幹細胞モデルにおける、EMT前後、Ras遺伝子の有無、2D vs 3D培養条件下でのRNAシークエンスのデータを取得し、京大時代に取得したメタボロームデータと合わせて解析を進め、間葉系細胞ではグルタチオンの蓄積があることを見出した。また癌幹細胞様細胞である、HMLER間葉細胞 (Ras間葉細胞) の3D培養特異的な代謝物を同定した。ソルビトール経路の代謝亢進を間葉細胞で認めたため、Ras間葉細胞に対する効果を期待して、エパルレスタットによアルドースリダクターゼ (AKR1B1) 阻害実験を行なった。既報に反して、EMTや増殖に対する効果は見られなかった。興味深いことに、間葉細胞より上皮細胞に対する増殖抑制効果が認められ、shP1・shH1による上皮化誘導と合成致死効果が得られる可能性がある。

The study of migration, infiltration, chemotherapy resistance, stem cell characteristics, epithelial mesenchymal transition, and the development of new tissue. The study of medium epithelialization induction, fat differentiation induction, NUMB gene and metabolic target has been carried out. In April 2022, the transmission sub-group was replaced by the EMT/MET dual reporter, and the MET effect of shP1 was confirmed. The transmission sub-group induction system was confirmed. Cell cycle epithelialization, fat differentiation induction and cell cycle regulation are regulated by lentivirus fucci reporter and introduced into various mesenchymal lines. Adipose differentiation induced by shRNA MET and rosiglitazone (CD36 expression and BODIPY activation) was identified in mesenchymal breast cancer cell lines. Cancer stem cells were cultured in 2D vs. 3D culture conditions, and the results were analyzed. Mesenchymal cells were cultured in 2D vs. 3D culture conditions. Cancer stem cells, HMLER mesenchymal cells (Ras mesenchymal cells) and 3D culture-specific metabolites were identified. The metabolic hyperactivity of the Ras mesenchymal cells is expected to be inhibited by the AKR1B1 pathway. Both the report and the EMT report were published in the journal. It is possible that the growth inhibition effect of the mesenchymal cells and epithelial cells can be recognized, and the epithelialization induction effect of the epithelial cells and the synthetic lethal effect can be obtained.