軽鎖沈着症を生じるM蛋白の構造的・機能的“質”の解明

阐明导致轻链沉积病的 M 蛋白的结构和功能“质量”

• 批准号: 22K08498
• 负责人: 西岡 亮
• 金额: $ 2.41万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08498/
• 关键词: M蛋白; 構造的特徴; 軽鎖沈着症; バイオインフォマティクス; 酵母内発現系

申請者らは自験例及び既存の報告情報より既に15例分のmonoclonal light chains(mLCs)の遺伝子情報を既に収集し（非病原性mLCs 5例、LCDD:Light chain deposition disease 7例、AL-A:AL amyloidosis 3例）、収集したmLCsの各々の生物科学的特性を解析する為、非病原性mLCs、LCDD-mLCs、AL-A-mLCsから各1症例を選択してin silicoにmLCの立体構造をホモロジー・モデリングで解析し、「mLCsの表面荷電がanionic chargeとなることがmLCs凝集の原因」との仮説に基づき表面電荷分布からmLCs凝集に関与する想定されるmotifを推定した。その上で当該motifをgermline配列に変換した改変配列をLCDD-mLCsで1例、AL-A-mLCsで1例作成し、当該motifの病原性への関与を検証する材料とした。「mLCsの表面荷電がanionic chargeとなることがmLCs凝集の原因」という仮説の検証についてはmLCs遺伝子にgreen fluorescent protein(GFP)遺伝子を付加した合成遺伝子を作成して酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)に導入し、GFP付加mLCsを酵母内で発現させその発光態度が凝集しているか凝集していないかを以て検証することとした。これまで既に非病原性mLCsであるLEN蛋白、LCDD-mLCsであるGLA蛋白、AL-A-mLCs蛋白であるREC蛋白の酵母内発現に成功し、それらmLCsとリンクしているGFPの発色態度がLENはhomogenous pattern、GLAとRECはmLCs凝集(＝仮説上の病原性)を意味するspot patternを呈することを確認している。

The applicant has 15 cases of monocular light chains, and the existing report information is included.(mLCs) Information Collection (5 nonpathogenic mLCs, 7 LCDD:Light chain deposition disease, AL-A:AL amyloidosis 3 cases), collected mLCs and their bioscientific characteristics analysis, non-pathogenic mLCs, LCDD-mLCs, AL-A-mLCs are selected from 1 case each in silico, and the three-dimensional structure of mLC is analyzed."The cause of aggregation of mLCs due to anionic charge on the surface of mLCs" is proposed in this paper. In addition, when the motif is germline aligned, the LCD-mLCs and AL-A-mLCs are aligned, and when the motif is pathogenic, the materials are identified. "The cause of aggregation of mLCs due to anionic charge on the surface of mLCs" is described in this paper. The green fluorescent protein(GFP) gene of mLCs is added to the synthetic gene to be introduced into Saccharomyces cerevisiae. GFP is added to mLCs to be produced in yeast. The expression of LEN protein, LCDD-mLCs, GLA protein, AL-A-mLCs protein and REC protein in yeast was successful, and the expression of GFP protein in yeast was confirmed.