HIV感染におけるケモカイン受容体の動態解析とその多量体形成を標的とした薬剤開発

CXCR4に多量体形成に影響を与える可能性がある部位を同定し、それらの部位にアミノ酸変異を単独～複数導入し、変異CXCR4発現プラスミドの作成を行った。それらの変異CXCR4により多量体形成がどのように変化するかをCXCR4に蛍光色素を結合させることでFluorescence Resonance Energy Transfer (FRET)で評価したり、CXCR4にHISタグなどを結合させウエスタン・ブロッテイング法を用いて評価するなどしている。また、野生株及び変異CXCR4に対して、すでにケモカイン受容体への影響が報告されているCXCL-12などのケモカインやAMD-3100などの低分子化合物を作用させ、多量体形成やケモカイン受容体のシグナル伝達にどのように影響するかについても評価している。同時にこれらの変異CXCR4のHIV感染性についても変異CXCR4を発現させた細胞へのHIVを用いた直接的な感染実験の他、CD4-CXCR4発現させた標的細胞に対し、gp120・TATなどを発現させたエフェクター細胞を反応させるfusion assayなどの手法を用いて評価を行っている。上述の結果と合わせて、ケモカイン受容体の多量体形成がHIV感染に阻害的に働く可能性を見出しているが、更なる検証が必要である。

CXCR4に多量体形成に影響を与える可能性がある部位を同定し、それらの部位にアミノ酸変異を単独～複数導入し、変異CXCR4発現プラスミドの作成を行った。それらの変異CXCR4により多量体形成がどのように変化するかをCXCR4に蛍光色素を結合させることでFluorescence Resonance Energy Transfer (FRET)で評価したり、CXCR4にHISタグなどを結合させウエスタン・ブロッテイング法を用いて評価するなどしている。また、野生株及び変異CXCR4に対して、すでにケモカイン受容体への影響が報告されているCXCL-12などのケモカインやAMD-3100などの低分子化合物を作用させ、多量体形成やケモカイン受容体のシグナル伝達にどのように影響するかについても評価している。同時にこれらの変異CXCR4のHIV感染性についても変異CXCR4を発現させた細胞へのHIVを用いた直接的な感染実験の他、CD4-CXCR4発現させた標的細胞に対し、gp120・TATなどを発現させたエフェクター細胞を反応させるfusion assayなどの手法を用いて評価を行っている。上述の結果と合わせて、ケモカイン受容体の多量体形成がHIV感染に阻害的に働く可能性を見出しているが、更なる検証が必要である。